为建立一种小反刍兽疫病毒(PPRV)抗体的快速检测方法，本研究将pET-32a-N重组质粒转化至E.coli BL21(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达、纯化获得重组蛋白并免疫BALB/c小鼠，制备了抗PPRV-N蛋白的单克隆抗体并进行HRP标记，通过优化反应条件建立了PPRV阻断ELISA抗体检测方法。经评价该方法与PIV、GTPV、ORFV的阳性血清均无交叉反应；最低能检出1∶160稀释的阳性血清；批内和批间变异系数(C_v)均小于10%;通过对180份临床血清样品进行检测，该方法与竞争ELISA试剂盒的符合率为96%。表明建立的阻断ELISA方法具有良好的特异性、敏感性与可重复性，可用于PPRV抗体的检测，为PPRV疫苗的免疫效果评估及疫病防控提供了技术支持。