基于天然poIFN-α17突变的高活性猪干扰素α17m的制备及其体外抗病毒活性

方剑玉, 游一, 席燕燕, 张青娴, 毛展展, 徐彬, 郎丽敏, 陈红英, 李绍钰

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (05) : 921-927. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.07

基于天然poIFN-α17突变的高活性猪干扰素α17m的制备及其体外抗病毒活性

  • 方剑玉, 游一, 席燕燕, 张青娴, 毛展展, 徐彬, 郎丽敏, 陈红英, 李绍钰
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摘要

为获得高抗病毒活性的猪α亚型干扰素(porcine interferon α,poIFN-α),将天然的poIFN-α17进行突变和合成,并将突变后的猪poIFN-α17基因命名为poIFN-α17m,合成poIFN-α17和poIFN-α17m基因后将其克隆入pVB220大肠杆菌表达载体,将该载体转化DH5α感受态细胞,进行温度诱导表达后,收集菌体进行SDS-PAGE。将表达的蛋白采用Ni琼脂糖凝胶纯化后,采用Western blot检测重组poIFN-α17和poIFN-α17m的反应原性,在PK-15细胞上检测其对VSV和PRV的抗病毒活性,检测重组poIFN-α17和poIFN-α17m蛋白对下游干扰素刺激基因(interferon stimulating genes, ISGs)Mx1、OAS1、ISG15的诱导激活作用。结果显示,成功构建了pVB220-IFN-α17和pVB220-IFN-α17m表达载体,实现了poIFN-α17和poIFN-α17m在大肠杆菌中的表达。该蛋白具有良好的反应原性,且重组poIFN-α17m在PK-15细胞上对水泡性口炎病毒(vesicular stomatitis virus, VSV)和猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)的抗病毒活性明显高于天然的poIFN-α17,重组poIFN-α17m能有效激活ISGs的表达。

关键词

猪干扰素α17m / 大肠杆菌表达 / 干扰素刺激基因 / 抗病毒

中图分类号

S859.797

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方剑玉, 游一, 席燕燕, 张青娴, 毛展展, 徐彬, 郎丽敏, 陈红英, 李绍钰. 基于天然poIFN-α17突变的高活性猪干扰素α17m的制备及其体外抗病毒活性. 中国兽医学报. 2024, 44(05): 921-927 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.07

基金

河南省科技攻关基金资助项目(222102110054); 河南省农业科学院自主创新基金资助项目(2023ZC059)

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