血清1型FAdV TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用

刘琳, 宋亚鹏, 刘明洋, 高文明, 陶明月, 宋晓楠, 张宜娜, 李新生

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (05) : 881-886. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.01

血清1型FAdV TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用

  • 刘琳, 宋亚鹏, 刘明洋, 高文明, 陶明月, 宋晓楠, 张宜娜, 李新生
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摘要

为特异性地检测家禽中血清1型禽腺病毒(fowl adenovirus, FAdV)的感染,本研究以血清1型FAdV保守的52K基因为模板设计引物和探针,通过矩阵法优化后建立了针对该病毒的TaqMan探针实时荧光定量PCR方法,并用该方法检测1日龄SPF鸡攻毒后咽、肛拭子排毒量及组织病毒载量。结果显示,该方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,只能检测出血清1型FAdV,对其他血清型FAdV和其他禽类病毒均无阳性扩增;最低检测限度低至10拷贝/μL;组间和组内离散度均小于2%;标准曲线为y=-3.836x+41.791,相关系数R~2=0.996,具有良好的线性关系;对SPF鸡攻毒结果显示,在攻毒后第1~14日的咽、肛拭子均可检测到血清1型FAdV,在攻毒后第8日的肝脏、肾脏、肌胃、回肠中也可检测到病毒,而腺胃和盲肠中未检出病毒。本研究为血清1型FAdV的定量检测提供了方法。

关键词

血清1型FAdV / TaqMan探针 / 荧光定量PCR

中图分类号

S855.3

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刘琳, 宋亚鹏, 刘明洋, 高文明, 陶明月, 宋晓楠, 张宜娜, 李新生. 血清1型FAdV TaqMan探针荧光定量PCR方法的建立及应用. 中国兽医学报. 2024, 44(05): 881-886 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.05.01

基金

国家自然科学基金青年基金资助项目(32102653); 河南省高等学校重点科研资助项目(23B230002); 河南省科技攻关基金资助项目(232102110083)

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