猪DUXA基因克隆及过表达载体的构建

吕美云, 张云川, 齐赟佳, 佘柳, 石德顺, 罗婵

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (04) : 815-822+862. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.04.24

猪DUXA基因克隆及过表达载体的构建

  • 吕美云, 张云川, 齐赟佳, 佘柳, 石德顺, 罗婵
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摘要

收集猪体外受精(IVF)和体细胞核移植(SCNT)的2-细胞、4-细胞、8-细胞和16-细胞时期的胚胎,对各细胞阶段DUXA基因的表达进行比较分析;提取猪卵巢的RNA后通过RT-PCR克隆得到DUXA目的基因,对DUXA基因进行生物信息学分析;将目的基因片段连接至pCDNA3.1-EGFP载体中,再将载体转染至293T细胞中。结果显示,与IVF胚胎相比,DUXA基因在SCNT胚胎中的表达滞后;克隆的DUXA基因编码区全长678 bp,与预期相符;核苷酸序列比对分析显示,猪DUXA和马DUXA基因同源性最高;各物种间DUXA蛋白氨基酸保守性较高;进化树结果显示,猪DUXA基因与骆驼相应序列聚为一支,与山羊、水牛、长江江豚等哺乳动物的遗传距离相对较近;利用在线分析工具对猪DUXA编码蛋白的理化性质进行预测,结果显示猪DUXA的化学分子式C_(1 082)H_(1 732)N_(344)O_(354)S_7,相对分子质量为25 448.17,理论等电点为9.4;猪DUXA二级结构预测包含11个α-螺旋、3个β-折叠、19个T-转角和20个无规则卷曲,具有2个HOX结构域,预测其为细胞膜外蛋白,其三级结构和黄牛、山羊、人相似。构建的pCDNA3.1-EGF-DUXA质粒载体长度为6 797 bp,转染结果显示构建的过表达载体可以在293T细胞中表达。结果表明,本试验成功克隆了猪DUXA基因,并成功构建了过表达载体pCDNA3.1-EGFP-DUXA。

关键词

/ DUXA基因 / 基因克隆 / 序列比对分析 / 载体构建

中图分类号

S828

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吕美云, 张云川, 齐赟佳, 佘柳, 石德顺, 罗婵. 猪DUXA基因克隆及过表达载体的构建. 中国兽医学报. 2024, 44(04): 815-822+862 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.04.24

基金

国家自然科学基金资助项目(31760666); 广西壮族自治区自然科学基金资助项目(2020JJD130069)

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