脂滴相关蛋白Rab18对猪血凝性脑脊髓炎病毒复殖和转运的影响

韦寒露, 母少倩, 田轶涵, 邱瑞召, 陆慧君, 兰云刚, 李姿, 高丰, 贺文琦

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中国兽医学报 ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (04) : 774-780. DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.04.18

脂滴相关蛋白Rab18对猪血凝性脑脊髓炎病毒复殖和转运的影响

  • 韦寒露, 母少倩, 田轶涵, 邱瑞召, 陆慧君, 兰云刚, 李姿, 高丰, 贺文琦
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摘要

通过分子克隆技术、RNAi技术及共聚焦显微镜技术检测Rab18蛋白对猪血凝性脑脊髓炎病毒(porcine haemagglutinating encephalomyelitis virus, PHEV)复殖和转运的影响。PCR技术扩增目的基因Rab18,将其插入pCMV-C-EGFP质粒中,构建野生型Rab18-EGFP过表达质粒;利用点突变盒子定点突变Rab18-EGFP,构建活化型Rab18和失活型Rab18过表达质粒。将成功构建的Rab18过表达质粒或者Rab18 siRNA转染小鼠神经瘤母细胞(neuro-2a cells)后接种PHEV,通过Western blot和qPCR检测PHEV蛋白和基因表达。结果显示,活化型Rab18促进PHEV的增殖和释放,失活型Rab18抑制PHEV的增殖;敲低Rab18后PHEV增殖及病毒的胞外释放受到抑制;利用共聚焦显微技术观察到PHEV、Rab18和LDs在细胞质中有明显共定位,且PHEV感染后Rab18与脂肪-甘油三酯-脂肪酶(ATGL)的共定位增强。结果表明,Rab18通过脂质代谢中LDs形成相关途径调控PHEV复殖与转运。

关键词

猪血凝性脑脊髓病毒 / Rab18 / 脂滴 / 胞内运输

中图分类号

S852.651

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韦寒露, 母少倩, 田轶涵, 邱瑞召, 陆慧君, 兰云刚, 李姿, 高丰, 贺文琦. 脂滴相关蛋白Rab18对猪血凝性脑脊髓炎病毒复殖和转运的影响. 中国兽医学报. 2024, 44(04): 774-780 https://doi.org/10.16303/j.cnki.1005-4545.2024.04.18

基金

教育部重点实验室开放课题资助项目(JLAU2021003); 吉林省科技厅农业重点科技攻关资助项目(20210202041NC); 吉林省创新平台资助项目(20230508002RC)

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