将猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)流行毒株的S胞外区基因克隆至含有gG基因上、下游同源臂以及抗性筛选基因的转移质粒pUC-ABK中，构建供体质粒pUC-ABK-S,获得线性同源重组片段A-S-K-B。利用Red同源重组技术将线性同源重组片段电转化至含有pPRVBac-GFP~(TK-gE-gI-11k-28k-)的感受态中获得重组pPRVBac-S,最后拯救获得重组病毒rPRV-S。PCR及IFA鉴定结果显示，S胞外区基因成功转录且表达，生物学特性评价结果表明重组病毒能够稳定遗传，为研制猪流行性腹泻病毒活载体疫苗提供了思路。