通过制备马立克病病毒(Marek's disease virus, MDV)血清Ⅲ型特异性单克隆抗体，并对其特性进行鉴定，为建立鸡马立克病(Marek's disease, MD)二价活疫苗间接免疫荧光蚀斑计数方法奠定基础。以纯化的MDV血清Ⅲ型HVT Fc-126株免疫BALB/c小鼠，采用常规单克隆抗体技术，经间接免疫荧光方法筛选杂交瘤细胞株；选取1株制备MDVⅢ型单克隆抗体，建立MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法。结果筛选出2株稳定分泌抗MDV血清Ⅲ型单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并选择1D2株单抗建立了检测MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数方法，可快速准确地计数二价活疫苗中血清Ⅲ型病毒的蚀斑形成单位数(Plaque forming unit, PFU),与琼脂覆盖法相比，敏感性和特异性大大提高。因此，制备的MDV单克隆抗体具有良好的血清型特异性，可用于MD二价活疫苗的间接免疫荧光蚀斑计数。