为了建立一种可同时检测并鉴别猪繁殖和呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪链球菌(SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pm)多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，本试验通过MEGA7.0分析NCBI上已登录的3种病原体基因序列，分别根据PRRSV的ORF6基因、SS的GDH基因和Pm的KMT1基因设计出特异性引物和探针，并对反应条件进行优化。结果显示，该方法能够特异性地检测PRRSV、SS和Pm,对其他病原无交叉反应；对PRRSV、SS和Pm的最低检测浓度分别为9.93×10~2、1.10×10~2和1.07×10~2拷贝/μL;组内和组间变异系数均小于1.85%。结果表明，该方法特异性强、灵敏性高、稳定性好，可应用于临床检测。