猫白血病病毒(FeLV)是一种在家猫和野生猫科动物中水平传播的逆转录病毒，可引起淋巴肿瘤、免疫抑制、贫血等疾病，且国内缺乏针对FeLV的诊断试剂及预防或治疗用生物制剂。膜表面糖蛋白gp70是FeLV中和抗体的主要作用靶点，本研究通过构建gp70重组表达载体，表达纯化gp70重组蛋白，并以纯化的gp70蛋白免疫6周龄的BALB/c小鼠，进行单克隆抗体的制备。结果表明，成功构建了pET-32a-gp70重组表达质粒，并应用IPTG诱导表达、包涵体纯化获得了原核表达的gp70重组蛋白；成功制备出3株能稳定分泌针对gp70蛋白的单克隆抗体杂交瘤细胞株，分别命名为2H5、3B1、5A8;Western blot检测表明仅有2H5单克隆抗体能与gp70蛋白特异性结合；IFA检测表明2H5单克隆抗体能与真核杆状病毒表达的gp70蛋白发生特异性反应，2H5单抗效价可达1∶2 048 000。本研究成功制备了针对FeLV gp70蛋白的单克隆抗体，为进一步建立准确快速的FeLV诊断方法及研究预防或治疗用生物制剂奠定基础。