为研究野梧桐种子乙酸乙酯萃取物的抗糖尿病活性成分，综合运用柱色谱、制备型高效液相色谱法对其进行系统的植化分离，并通过核磁共振（NMR）等谱学技术及对比文献报道进行结构鉴定。对分离得到的化合物进行体外α-葡萄糖苷酶抑制活性及抗氧化活性[DPPH、ABTS自由基清除和铁离子还原抗氧化能力（FRAP）]测试，利用分子对接技术对活性化合物的抑酶作用机制进行初步研究。结果表明：从乙酸乙酯萃取层中分离到20个化合物，分别鉴定为芹菜素（1）、山柰酚（2）、槲皮素（3）、山柰酚3-O-α-l-吡喃鼠李糖苷（4）、异鼠李素-3-O-β-d-吡喃葡萄糖-7-O-α-l-吡喃鼠李糖苷（5）、短叶苏木酚（6）、1,2-二（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1,3-丙二醇（7）、香草酸（8）、水杨酸（9）、4-丙酮基-3,5-二甲氧基-1,4-对醌醇（10）、熊果苷（11）、它乔糖苷（12）、红景天苷（13）、水杨苷（14）、（-）-（7S,8R）-3-甲氧基-4-羟基苯基丙三醇-9-O-β-d-吡喃葡萄糖苷（15）、（-）-（7R,8R）-3,5-二甲氧基-4-羟基苯基丙三醇-9-O-β-d-吡喃葡萄糖苷（16）、（6R,9S）-9-hydroxymegastigma-4,7-dien-3-one-9-O-β-d-glucopyranoside（17）、（6S,9S）-长寿花糖苷（18）、淫羊藿次苷B₁（19）和腺苷（20）。其中化合物57、920为首次从野桐属植物中分离得到。化合物13、6、7、15、16有较强的α-葡萄糖苷酶抑制活性，明显强于阳性对照阿卡波糖；化合物3和6有较好的抗氧化活性，优于阳性对照水溶性维生素E。分子对接结果显示化合物3、7均能作用于α-葡萄糖苷酶的活性中心，并与关键氨基酸残基发生相互作用，从而阻止碳水化合物进入酶活性口袋，减缓葡萄糖的生成。综上，这一该研究阐明了野梧桐种子防治糖尿病的药效物质基础，可为其开发利用提供科学依据。