目的 了解新生儿急性细菌性结膜炎的致病菌，寻找有效的抗菌药物，为临床提供合理的治疗方案。方法 对159例经确诊为急性细菌性结膜炎新生儿的结膜囊分泌物进行细菌培养和药敏试验，对研究结果进行分析。结果 新生儿急性细菌性结膜炎的细菌培养阳性结果为130例，阳性检出率为81.8%,不同年份（2013—2016年）检出的细菌阳性率差异无统计学意义（χ²=0.695,P>0.05）。表皮葡萄球菌（48.5%）、腐生葡萄球菌（22.3%）、淋球菌（38.7%）、肺炎克雷伯菌（32.3%）均是新生儿急性细菌性结膜炎的主要病原菌，菌株对红霉素、新霉素、青霉素和利福平耐药率高，对喹喏酮类和头孢类药物耐药率低。结论 对新生儿急性细菌性结膜炎结膜囊分泌物进行细菌培养和药敏试验，有助于提高用药的治疗效果，减少病原菌的耐药性。