克隆性基因重排检测BIOMED-2系统中内对照体系的改进

杨军, 叶庆, 张标

徐州医科大学学报 ›› 2017, Vol. 37 ›› Issue (06) : 377-380.

克隆性基因重排检测BIOMED-2系统中内对照体系的改进

  • 杨军, 叶庆, 张标
作者信息 +
History +

摘要

目的 监测克隆性基因重排各检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性,避免基因重排的假阴性结果。方法 利用多重PCR方法,检测免疫球蛋白(Ig)中IgH-FR1、IgH-FR2、IgH-FR3、IgK-VJ、IgK-V/i克隆性基因重排和T细胞受体(TCR)中TCRβ-VJ1、TCRβ-VJ2、TCRβ-DJ、TCRγ-VJ1和TCRγ-VJ2克隆性基因重排。(1)选择GC100和GC300作为管内对照,在各反应管中加入适当的内对照引物,浓度分别为0.625μmol/L、1.25μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L,PCR扩增后行聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE),分析结果。(2)根据(1)的实验结果,在各反应管中加入最适浓度内对照,以制备好的突变浓度为20%、10%、7.5%、5%、2.5%的基因重排样本为模板,PCR扩增后行PAGE,分析结果。结果 克隆性重排检测引物工作液浓度均为10μmol/L;检测IgH-FR1、IgH-FR2、IgK-VJ、IgK-V/i、TCRβ-VJ1、TCRβ-VJ2、TCRβ-DJ和TCRγ-VJ1各管中,加入管内对照基因的扩增片段大小均为100 bp,引物浓度均为5μmol/L;检测IgH-FR3管中,管内对照基因的扩增片段大小为300 bp,引物浓度为5μmol/L;检测TCRγ-VJ2管中,管内对照基因的扩增片段大小为300 bp,引物浓度为1.25μmol/L。改进后体系检测敏感度在2.5%~5.0%之间。结论 在BIOMED-2系统中增加合适的管内对照,能够监测每个检测管中PCR反应体系的完整性及反应条件的稳定性。

关键词

基因重排 / 聚丙烯酰胺凝胶电泳 / 假阴性 / 内对照

中图分类号

Q78

引用本文

导出引用
杨军, 叶庆, 张标. 克隆性基因重排检测BIOMED-2系统中内对照体系的改进. 徐州医科大学学报. 2017, 37(06): 377-380

基金

江苏省科技厅重点研发计划社会发展项目(BE2016604)

评论

Accesses

Citation

Detail

段落导航
相关文章

/