健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定

甘宜敏, 孔凡运, 史震, 汤仁仙, 郑葵阳

徐州医科大学学报 ›› 2010, Vol. 30 ›› Issue (04) : 219-222.

健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定

  • 甘宜敏, 孔凡运, 史震, 汤仁仙, 郑葵阳
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摘要

目的克隆人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G(apolipoprotein B mRNA editing enzyme,catalyticpolypeptide 3G,APOBEC3G)基因cDNA,构建APOBEC3G基因的真核表达载体,并在体外进行表达和鉴定。方法采用RT-PCR技术从健康人外周血单个核细胞中克隆APOBEC3G基因,将该基因插入pcDNA3.1真核表达载体,构建pcDNA3.1-A3G真核表达质粒,并利用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-A3G转染HepG2和HL7702细胞,经免疫细胞化学、Western blot等方法检测APOBEC3G真核表达情况。结果双酶切鉴定和测序结果表明,APOBEC3G真核表达载体构建成功。免疫细胞化学和Western blot结果均显示,转染pcDNA3.1-A3G的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白均高表达,转染空质粒pcDNA3.1和未转染的HepG2和HL7702细胞APOBEC3G蛋白低表达或不表达。结论成功构建了人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3G真核表达载体pcDNA3.1-A3G,为进一步研究APOBEC3G抗HBV作用奠定实验基础。

关键词

APOBEC3G / 克隆 / 真核表达载体

中图分类号

Q789

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甘宜敏, 孔凡运, 史震, 汤仁仙, 郑葵阳. 健康人APOBEC3G基因的克隆及真核表达载体的构建与鉴定. 徐州医科大学学报. 2010, 30(04): 219-222

基金

徐州市科委课题(XM07C056); 徐州医学院课题(09KJ02)

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