目的 制备抗人B7同源物4(B7-H4)IgY多克隆抗体，建立合适的双抗体夹心ELISA检测人血清中可溶性B7-H4(sB7-H4)蛋白。方法 筛选人源B7-H4蛋白合适的B细胞表位肽免疫新海兰灰蛋鸡，收集鸡蛋纯化鸡抗人B7-H4 IgY抗体；检测抗体的纯度、浓度及效价，并用ELISA、 Western blot、流式细胞术验证抗体的特异性和功能；建立双抗体夹心ELISA法并检测临床样本；同时采用商品化的ELISA试剂盒对相同样本进行对比检测。结果 制备了鸡抗人B7-H4 IgY抗体并证明该抗体对人B7-H4蛋白有高特异性；采用该抗体检测临床样本发现卵巢癌和良性卵巢肿瘤患者血清中sB7-H4含量明显高于健康人，这与使用商品试剂盒获得的检测结果一致；采用IgY抗体建立的ELISA灵敏度高于商品试剂盒。结论 成功制备了鸡抗人B7-H4 IgY多克隆抗体，并用其建立了一种适合检测人血清中sB7-H4蛋白的双抗体夹心ELISA。