目的 筛选一种抗人密封蛋白18剪接变异体2(Claudin18.2)的单克隆抗体(mAb),并基于该抗体序列构建靶向Claudin18.2的嵌合抗原受体T (CAR-T)细胞，用于开发CAR-T细胞疗法。方法 用人Claudin18.2抗原免疫小鼠，取小鼠脾细胞与SP2/0细胞进行细胞融合，经筛选获得小鼠抗人Claudin18.2 mAb。以抗体序列为模板PCR扩增出重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)序列，用接头(linker)连接成单链抗体(scFv),并用此scFv构建CAR。将CAR克隆至慢病毒表达载体中，用包装好的慢病毒感染T细胞制备出抗Claudin18.2 CAR-T细胞。结果 筛选到的小鼠抗人Claudin18.2 mAb对人和鼠的Claudin18.2抗原都有结合能力，亲和力高于对照抗体。构建的CAR-T细胞在效靶比1∶9时，对过表达Claudin18.2的阳性靶细胞的杀伤率在50%～70%。结论 制备的小鼠抗人Claudin18.2 mAb具有人鼠双种属特异性，组织特异性良好，亲和力高。构建的anti-Claudin18.2 CAR-T细胞对靶细胞具有良好杀伤效果。