目的：建立地龙中次黄嘌呤与肌苷含量的测定方法，测定五种产地地龙成分，为地龙成分的提取工艺研究、质量分析探索新型高效的研究方法。方法：建立HPLC高效液相色谱法测定分析方法。色谱柱Agilent extend C18色谱柱，4.6 mm×250 mm，粒径：5μm。流动相为甲醇-0.2%磷酸，波长选择254 nm，进样量选择20μL，柱温为30℃，使用梯度洗脱法，建立次黄嘌呤和肌苷的标准曲线，进行精密度试验，稳定性试验，重复性试验，加样回收试验等方法学考察。结果：次黄嘌呤标准曲线：y=78.819x+245.92,R²=0.999 9,在10.08～161.28μg·mL^-1范围内呈良好线性关系;肌苷标准曲线：y=56.566x+68.333,R²=0.999 5,在20.08～321.28μg·mL^-1范围内呈良好线性关系。实验精密度、稳定性、重复性良好，计算得到次黄嘌呤的平均回收率为95.43%,RSD值为1.52%（n=6）；肌苷的平均回收率为99.86%,RSD值为2.36%（n=6），广东、河南、海南、上海、广西五种产地地龙的次黄嘌呤含量分别为：0.533 5、0.346 8、0.687 4、0.569 4、0.794 5 mg·g^-1；肌苷含量为：1.562 5、0.567 4、1.126 7、0.843 6、1.284 9 mg·g^-1。结论：建立的HPLC高效液相色谱法，梯度洗脱效果较好，实验准确度良好，精密度良好，稳定性良好，重复性高，是一种高效的分析测定方法。