副溶血弧菌lux报告基因系统的建立与应用

薛星帆, 张苗苗, 张婷婷, 吴齐敏, 陆仁飞, 张义全

南通大学学报(医学版) ›› 2024, Vol. 44 ›› Issue (04) : 349-353. DOI: 10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2024.04.011

副溶血弧菌lux报告基因系统的建立与应用

  • 薛星帆, 张苗苗, 张婷婷, 吴齐敏, 陆仁飞, 张义全
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摘要

目的:建立副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台,为后续研究基因转录调控机制奠定基础。方法 :采用PCR扩增opaR的启动子区序列,并将其克隆入pBBRlux质粒中,构建重组质粒opaR-lux。将opaR-lux重组质粒分别转入野生株(WT)、opaR突变株(ΔopaR)和aphA突变株(ΔaphA)中,检测特定培养条件下三者发出的冷光值(Lux)以及在600 nm处的吸光度值(OD600),以“Lux/OD600”表示单位OD600下的相对平均冷光单位(relative light unit, RLU)。通过比较各菌株的RLU大小,判断OpaR和AphA对opaR的调控关系,以检验实验平台的稳定性。结果:成功构建出带有opaR的p BBRlux重组质粒;在低密度(OD600<0.4)时,AphA负调控opaR的转录,当细菌达到高密度(OD600=0.8)时,AphA则对opaR的转录不起调控作用;在细菌从低密度生长到高密度(即OD600<0.8)中,OpaR对自身的转录存在负调控作用。结论 :成功建立了副溶血弧菌的lux报告基因融合实验平台,用于后续转录调控机制的研究。

关键词

副溶血弧菌 / OpaR / AphA / lux

中图分类号

R378

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薛星帆, 张苗苗, 张婷婷, 吴齐敏, 陆仁飞, 张义全. 副溶血弧菌lux报告基因系统的建立与应用. 南通大学学报(医学版). 2024, 44(04): 349-353 https://doi.org/10.16424/j.cnki.cn32-1807/r.2024.04.011

基金

南通大学临床医学专项项目(2022JZ010); 中国博士后科学基金第68批面上资助项目(2020M681513); 江苏省博士后科研资助计划项目(2020Z102)

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