猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究

孙鑫, 杨利, 郭东辉, 马旭东, 杜露平, 侯立婷, 陈瑾, 冯秀丽, 郑其升, 程海卫

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南京农业大学学报 ›› 2024, Vol. 47 ›› Issue (05) : 941-947.

猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究

  • 孙鑫, 杨利, 郭东辉, 马旭东, 杜露平, 侯立婷, 陈瑾, 冯秀丽, 郑其升, 程海卫
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摘要

[目的]猪CD205分子作为猪树突状细胞(DC)特异性的抗原提呈受体,在抗原提呈过程中起关键作用。本研究通过噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行筛选以获得其特异性的纳米抗体,为猪CD205靶向抗原提呈研究奠定基础。[方法]利用前期制备的猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行羊驼免疫,经6次皮下免疫后采集羊驼外周血淋巴细胞,提取总RNA后反转录获得cDNA,经PCR扩增编码纳米抗体的基因片段,构建猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白噬菌体展示纳米抗体基因文库,再运用噬菌体展示技术针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白进行亲和筛选,随机挑选单克隆菌落并使用Phage-ELISA方法鉴定出针对猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白的特异性纳米抗体。[结果]4轮亲和筛选后,通过Phage-ELISA方法鉴定和序列比对分析,共成功获得12个猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性纳米抗体,其相对分子质量约为17×10~3。[结论]本研究成功筛选并获得猪CD205分子CysR-FNⅡ蛋白特异性的纳米抗体。

关键词

/ CD205 / CysR-FNⅡ / 纳米抗体 / 噬菌体展示

中图分类号

S852.4

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孙鑫, 杨利, 郭东辉, 马旭东, 杜露平, 侯立婷, 陈瑾, 冯秀丽, 郑其升, 程海卫. 猪CD205分子CysR-FN Ⅱ蛋白特异性纳米抗体的筛选与鉴定研究. 南京农业大学学报. 2024, 47(05): 941-947

基金

国家自然科学基金项目(32102690); “十四五”重点研发计划项目(2022YFD1800800)

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