猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用

齐佳欣, 钟秋, 刘芮伶, 郑健, 李昱辰, 杨倩

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南京农业大学学报 ›› 2024, Vol. 47 ›› Issue (05) : 932-940.

猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用

  • 齐佳欣, 钟秋, 刘芮伶, 郑健, 李昱辰, 杨倩
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摘要

[目的]本研究旨在探究CXC趋化因子配体17(CXC motif chemokine ligand 17,CXCL17)对巨噬细胞的趋化作用并解析其分子机制。[方法]构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌,该菌经IPTG诱导后高效表达CXCL17蛋白,并主要以包涵体形式存在;包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白,利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白对猪巨噬细胞的最佳作用浓度范围,并以此设置浓度梯度处理猪巨噬细胞,用Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性。通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况,以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果]重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L-1及37℃诱导条件下表达7 h,获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白纯化后的纯度可高达95%。重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖诱导猪巨噬细胞迁移,其机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排,促进细胞微丝骨架解聚、聚合,从而有利于巨噬细胞迁移。[结论]本研究重组表达了猪CXCL17蛋白,并发现CXCL17蛋白调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制,为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供了试验依据。

关键词

CXC趋化因子配体17 / 原核表达 / 巨噬细胞 / 迁移 / 黏膜免疫

中图分类号

S852.4

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齐佳欣, 钟秋, 刘芮伶, 郑健, 李昱辰, 杨倩. 猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用. 南京农业大学学报. 2024, 47(05): 932-940

基金

江苏省自然科学基金青年基金项目(BK20240198,BK20200536)

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