[目的]本文旨在建立检测犬血浆中阿莫西林和克拉维酸片的UPLC-MS/MS方法，并进行犬口服国产阿莫西林克拉维酸钾片与参比制剂的生物等效性评价。[方法]以乙腈和甲酸水溶液为流动相，经HSS T3色谱柱梯度洗脱，阿莫西林和克拉维酸分别用电喷雾正、负离子模式进行多反应监测(MRM),血浆样品用乙腈沉淀蛋白、二氯甲烷萃取，对于克拉维酸血浆样品的预处理增加正己烷除脂的步骤，经方法学验证后分别检测血浆样品中阿莫西林与克拉维酸浓度。生物等效性试验采用单剂量、双处理、双周期随机交叉试验设计，选用26只健康成年比格犬，按顺序分别空腹口服参比制剂或受试制剂250 mg,再用建立的UPLC-MS/MS法检测血浆中阿莫西林和克拉维酸的浓度；采用Phoenix Winnonlin 8.1药动学软件的非房室模型计算药物的药动学参数，对C_(max)、AUC_(0-t)和AUC_(0-∞)进行对数转换后分析药物生物等效性。[结果]该方法专属性良好；阿莫西林在20～10 000 ng·mL~(-1)、克拉维酸在50～5 000 ng·mL~(-1)浓度范围内的信号响应值与浓度线性关系良好(R~2>0.99);批内、批间准确度偏差均在±15%以内，批内、批间精密度均在15%以内；基质效应符合要求，阿莫西林和克拉维酸在试验条件下稳定。参比制剂和受试制剂中：阿莫西林的C_(max)分别为(10 934.87±3 118.79)ng·mL~(-1)和(11 101.66±3 185.09)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)分别为(30 983.24±9 395.40)ng·h·mL~(-1)和(31 646.91±9 319.93)ng·h·mL~(-1),AUC_(0-∞)分别为(31 093.42±9 425.85)ng·h·mL~(-1)和(31 843.77±9 290.25)ng·h·mL~(-1);克拉维酸的C_(max)分别为(3 494.90±1 574.11)ng·mL~(-1)和(3 694.26±1 701.65)ng·mL~(-1),AUC_(0-t)分别为(5 652.61±2 409.17)ng·h·mL~(-1)和(6 041.81±2 458.42)ng·h·mL~(-1),AUC_(0-∞)分别为(5 730.52±2 392.78)ng·h·mL~(-1)和(6 122.80±2 469.20)ng·h·mL~(-1),C_(max)、AUC_(0-t)、AUC_(0-∞)经对数转换后几何均值比的90%置信区间均落在80.00%～125.00%,T_(max)经非参数检验无明显差异。[结论]所建UPLC-MS/MS方法符合生物样品分析要求，国产阿莫西林克拉维酸钾片与参比制剂在犬体内生物等效。