目的 观察经聚乙二醇干扰素-α-2b（PEG-IFN-α-2b）治疗后，HBeAg阴性慢性HBV感染者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞活性的变化。方法 纳入2020年4月—2022年6月于新乡医学院第一附属医院、空军军医大学唐都医院就诊的HBe Ag阴性慢性HBV感染者53例，予以PEG-IFN-α-2b（180μg/周，皮下注射）抗病毒治疗，研究终点为HBsAg阴转（疗程<48周）或48周（疗程≥48周），分别选取基线和研究终点外周血单个核细胞，检测外周血T淋巴细胞计数，酶联免疫斑点试验检测分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞频数。选择HLA-A^*02限制性患者17例，纯化CD8⁺T淋巴细胞，建立HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞与Hep G2.2.15细胞直接接触和间接接触共培养系统，通过检测上清中乳酸脱氢酶水平计算Hep G2.2.15细胞死亡率，检测上清中HBV DNA水平、毒性分子和细胞因子分泌，流式细胞术检测凋亡配体表达，评估HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞的杀伤功能。符合正态分布的计量资料2组间比较采用成组t检验或配对t检验，不符合正态分布的计量资料2组间比较采用Mann-Whitney U检验或Wilcoxon秩和检验。结果 研究终点时，HBsAg阴转率为30.19%（16/53）。外周血T淋巴细胞计数（CD3⁺、CD4⁺、CD8⁺T淋巴细胞）在基线和研究终点时的差异均无统计学意义（P值均>0.05）。研究终点时，患者分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞频数较基线显著升高（U=177.50,t=11.90,U=186.50,P值均<0.001），发生HBsAg阴转的患者分泌穿孔素、颗粒酶B、IFN-γ的HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞频数亦显著高于未发生HBsAg阴转的患者（U=120.50,t=2.73,U=121.50,P值均<0.01）。在直接接触和间接接触共培养系统中，研究终点时HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞均可诱导Hep G2.2.15细胞上清中HBV DNA显著下降（P值均<0.001）,IFN-γ和TNF-α分泌水平显著升高（P值均<0.05），但仅在直接接触共培养系统中HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞诱导Hep G2.2.15细胞死亡比例升高（13.62%±3.27%vs 11.39%±2.40%,t=2.27,P=0.030），穿孔素和颗粒酶B分泌水平亦升高（t=72.50,U=52.50,P值均<0.05）。在直接接触和间接接触共培养系统中，发生HBsAg阴转的患者HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞较未发生HBsAg阴转的患者诱导HBV DNA下降水平均更显著（P值均<0.05）,IFN-γ和TNF-α分泌水平均升高（P值均<0.05）。结论 PEG-IFN-α-2b治疗HBe Ag阴性慢性HBV感染者可获得较高的HBsAg阴转率，HBV特异性CD8⁺T淋巴细胞活性显著增强，且与HBsAg阴转密切相关。