目的 筛选柯萨奇A组病毒16型（CA16）疫苗候选株，为手足口病疫苗研发提供前期基础。方法 对2019年3月至2020年3月来自昆明市不同地区的35份手足口病患者临床标本进行细胞接种及连续传代，对产生细胞病变的收获液通过CA16标准血清进行鉴别试验，阳性样本通过病毒滴度测定、蚀斑纯化、VP1序列同源性及进化分析，筛选疫苗株。结果 在收集的35份临床口咽拭子样本中，有23份出现细胞病变，经血清学鉴定10份为CA16病毒，阳性率为43.5%。10株病毒经适应性培养，病毒滴度逐渐升高，但从48 h开始趋于稳定，保持在7.0 lgCCID50。毒株蚀斑显示，所有毒株均可形成0.2～0.8 cm的空斑，呈现规则性差异，KM/M08蚀斑大小比较均一。所有毒株均为B1b型，核苷酸的同源性在93.3%～100%，其中KM/M08与其他毒株的同源性最高，在95.2%～100%之间。结论 通过病毒增殖动力学曲线及其基因同源性、进化分析，KM/M08在上述各方面评价中都比较符合预期筛选标准，拟作为疫苗候选株进行后续研究。