目的 对2022年云南省境内发现的1例（全省第4例）欧亚类禽猪流感病例进行分子流行病学调查，掌握其基因特征，揭示该新亚型欧亚类禽猪流感病毒对人类健康的潜在影响。方法 使用实时荧光定量PCR检测技术对病例的咽拭子标本、密切接触者和居住环境标本进行核酸检测。使用MDCK细胞进行阳性标本病毒分离，使用豚鼠血红细胞凝集实验和实时荧光定量RT-PCR方法对细胞培养物进行鉴定。通过Illumina Miseq二代基因测序平台进行全基因组测序，使用MEGA7.0软件构建系统发育树并分析其基因分子特征。结果 成功分离云南省首例G5基因型欧亚类禽猪流感病毒，并获得该病毒全基因组序列。该病毒具有在哺乳动物的适应性或毒力、传播性增强的相关分子特征，与江苏分离的一株猪源毒株序列具有99.2%～99.7%的核苷酸一致性。该病毒在人群中传播的风险进一步增加。结论 加强猪流感监测工作对于预防可感染人类的新型流感病毒亚型具有重要意义。