目的 建立天麻素在肝微粒体样品中的高效液相色谱(high performance liquid chromatography, HPLC)检测方法，鉴定天麻素在不同种属的体外代谢差异。方法 采用乙腈沉淀法处理天麻素肝微粒体样品，C18色谱柱(4.6 mm×250 mm, 5μm)分离，建立HPLC天麻素检测方法；天麻素和不同种属肝微粒分别在Ⅰ相(cytochrome P450,CYP)和Ⅱ相(uroidine diphosphate glucuronyl transferase, UGT)孵育体系下一起孵育，应用所建立的HPLC方法检测孵育后天麻素含量变化，确定其在不同种属的代谢差异。采用分子对接方式，预测天麻素和CYP酶的相互作用情况及作用位点。结果 所建立天麻素肝微粒体HPLC检测方法的精密度、准确度和稳定性均符合生物样品分析要求。天麻素在不同种属之间的代谢有明显差异，人和猴的代谢特点较为相似。CYP3A4和CYP2C19可能是天麻素的主要代谢酶，天麻素和CYP之间通过氢键相互作用。结论 天麻素在不同种属的代谢差异，将为其在药理和毒理研究中实验动物的选择提供依据。