为构建稳定表达CD19、萤火虫荧光素酶(FLUC)和绿色荧光蛋白(GFP)的乳腺癌4T1细胞系，以用作CD19嵌合抗原受体T细胞(CAR-T)的靶细胞模型，通过提取质粒、慢病毒包装及浓缩，感染4T1细胞后，经嘌呤霉素筛选和有限稀释法获得单克隆稳转细胞株4T1-CD19-FLUC-GFP。实时定量PCR和流式细胞术检测显示，4T1-CD19-FLUC-GFP细胞中CD19的mRNA和膜蛋白表达水平显著高于对照组4T1细胞。体内实验中，腋下植瘤4T1-CD19-FLUC-GFP细胞一周后，活体成像仪可检测到腋下部位的荧光信号。结果表明，成功构建了稳定表达CD19-FLUC-GFP的4T1细胞株，为CAR-T细胞抗肿瘤疗效机制研究提供了可靠的靶细胞模型和研究基础。