为了鉴定牦牛体内bta-miR-22-3p与KSR2之间的靶向关系，本研究采用miRNA Base数据库对牦牛体内bta-miR-22-3p的序列进行分析，并用Target scan软件预测牦牛bta-miR-22-3p于KSR2基因的3’UT R可能存在的结合位点，然后采用PCR扩增出包含bta-miR-22-3p结合位点的牦牛KSR2基因3'非编码区（3’UTR）片段，并构建出KSR2基因的3’UTR的野生型双荧光素酶报告基因质粒和突变型双荧光素酶报告基因质粒，并将其与bta-miR-22-3p mimics、mimics NC共转染至人胚肾细胞（HEK 293T细胞）中，检测其双荧光素酶活性。miRNA Base数据库中bta-miR-22-3p的序列为AAGCUGCCAGUUGAAGAACU G;Target scan预测出bta-miR-22-3p共有包括KSR2基因在内的568个潜在靶基因，其中包括612个保守位点和190个低保守位点，并且在KSR2基因3’UTR的829-836 bp处存在潜在的bta-miR-22-3p的结合位点；构建的野生型质粒和突变型质粒经双酶切后释放出大小315 bp的条带，测序结果与预期一致，说明质粒构建成功；bta-miR-22-3p mimics能够显著降低（P<0.01）KSR2野生型质粒双荧光素酶的活性。最终说明，牦牛KSR2基因3’UTR双荧光素酶报告基因载体构建成功，并且该基因与bta-miR-22-3p存在靶向关系。