藏猪是青藏高原特有的生态猪种，是我国珍贵的地方种质资源。为了保护藏猪种质资源，本试验通过组织块贴壁法和胰酶消化法对藏猪耳部成纤维细胞进行分离培养、传代与冻存，绘制其生长曲线，使用台盼蓝染色法进行细胞活力检测，并进行真菌细菌、病毒和支原体污染检测。结果显示，两种方法均长出梭形、纺锤形或星形的成纤维细胞，发现使用组织块贴壁法培养成纤维细胞比胰酶消化法更易生长、形态学特征和活力更好，冻存复苏的细胞可以正常贴壁生长和传代；其生长曲线为典型的“S”型，潜伏期存在3 d，对数生长期从第4 d开始持续到第8 d，从第9 d开始进入生长抑制期；台盼蓝染色检测活力发现冻存前后成纤维细胞的生长活率在90%以上，且发现不存在真菌细菌、病毒和支原体污染。本试验成功对藏猪耳组织成纤维细胞进行分离纯化培养与冻存，可为体外藏猪克隆提供材料，并为完善藏猪成纤维细胞种质资源库奠定基础。