目的：研究长链脂酰辅酶A合成酶3(ACSL3)在代谢应激下对肝细胞癌（HCC）细胞Huh7存活的影响。方法：从TCGALICH数据库下载HCC患者RNA表达谱和临床数据，统计ACSL3在HCC患者中的表达情况，绘制Kaplan-Meier生存曲线；在广西医科大学第一附属医院的HCC队列中收集44例原发性HCC患者的癌组织和癌旁组织样本，通过免疫组化检测ACSL3的表达；利用siRNA和CRISPR/CAS 9技术沉默/敲除Huh7细胞中的ACSL3基因，通过细胞计数试剂盒（CCK-8）实验、克隆形成实验和Transwell侵袭实验检测ACSL3敲除对Huh7细胞增殖和侵袭能力的影响。在完全培养基和葡萄糖缺乏条件下，通过流式细胞仪检测对照组细胞和ACSL3沉默/敲除组细胞的死亡情况，并检测细胞中ATP、β-羟基丁酸的变化。结果：与正常肝组织相比，HCC组织的ACSL3表达较高（P<0.05），且ACSL3高表达患者生存期较短（P<0.05）。敲除ACSL3不影响Huh7细胞的增殖能力、克隆形成能力以及侵袭能力（P>0.05）。在葡萄糖缺乏下，ACSL3沉默/敲除导致Huh7细胞的存活率显著下降（P<0.05）,ATP产生水平下降以及β-羟基丁酸生成受抑制（P<0.05）。结论：通过抑制β氧化，敲除ACSL3促进了HCC细胞死于葡萄糖缺乏。