目的 建立灵芝孢子粉的指纹图谱检测方法，探讨灵芝孢子油对炎症因子白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的影响。方法 采用高效液相色谱法(HPLC)和高效薄层色谱法(HPTLC)分析不同产地灵芝孢子粉的化学成分；采用MTT法测定细胞活力；ELISA法测定RAW264.7细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的表达水平。结果 HPLC指纹图谱标定共有峰12个，其中峰1～5号分别为灵芝酸C2、灵芝酸G、灵芝酸B、灵芝酸A、灵芝酸D;HPTLC现行版药典法显示10批样品均符合规定，采用三氯甲烷-乙腈-甲醇-甲酸(26∶4∶1∶1)为展开剂进行2次展开后，不同产地的原料质量斑点差异显著，与HPLC指纹图谱相似。灵芝孢子油浓度≤180μg/mL时，对RAW264.7细胞活性无明显影响；对LPS诱导的RAW264.7细胞的保护作用呈剂量依赖性；与模型组相比，中剂量组(90μg/mL)显著降低IL-1β表达(P<0.05),高剂量组(180μg/mL)显著降低IL-6和TNF-α的表达(P<0.05),轻微降低IL-1β的表达，但差异无统计学意义(P>0.05)。结论 灵芝孢子油是通过抑制炎症因子的释放来减轻机体的炎症，达到对免疫细胞的保护作用。通过HPTLC可初步鉴定孢子粉的质量，HPLC指纹图谱可精准控制原料质量，保障灵芝孢子油功效。