冠状病毒是迄今已知的基因组最大的RNA病毒，其中猪冠状病毒是引起仔猪急剧腹泻的重要病原体，具有高度变异特性，防控难度较高，每年给我国养猪业带来严重的经济损失。对冠状病毒RNA合成机制的解析有助于了解冠状病毒的遗传变异规律和筛选抗病毒药物，目前研究较深入的主要是鼠冠状病毒(murine coronavirus, MHV)和2型人严重呼吸道综合征冠状病毒(severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)。为探究猪冠状病毒的复制机制，本研究以MHV和SARS-CoV-2等冠状病毒为参考，总结了其与猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)、传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus, TGEV)、猪德尔塔冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)和猪急性腹泻综合征冠状病毒(swine acute diarrhea syndrome coronavirus, SADS-CoV)等猪冠状病毒非编码区调控病毒复制的机制。重点分析5′非编码区(5′untranslated region, 5′UTR)的保守基序及二级结构在病毒复制中的作用、3′UTR的保守结构如何调控病毒复制、病毒非编码区与宿主蛋白的相互作用调控病毒复制以及病毒非编码区变异特征等内容，为针对该类靶点的抗病毒药物和高病毒滴度疫苗候选株的开发提供理论基础。

猪氨肽酶N（porcine aminopeptidase N,pAPN）是一种锌金属蛋白酶，介导病毒与宿主细胞融合，是冠状病毒的细胞受体之一。为探究pAPN对猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus, PEDV）复制的影响，本研究从小肠组织中扩增出pAPN基因全长，通过限制性内切酶同源位点克隆到慢病毒载体中，获得携带pAPN基因的慢病毒载体PLVX-pAPN-mCMV-ZsGreen1-puro,在293T细胞中包装形成表达pAPN的慢病毒，将慢病毒感染Vero细胞，用嘌呤霉素加压筛选阳性细胞，采用有限稀释法筛选出稳定表达的Vero-pAPN细胞系，并通过测定N基因mRNA转录水平、N蛋白表达水平和TCID₅₀水平差异情况来验证该细胞系对PEDV复制的影响。结果显示，本研究构建的慢病毒能够感染Vero细胞，亚克隆筛选到的单克隆细胞株Vero-pAPN（2C5）能够稳定过表达pAPN;该细胞系能够促进PEDV复制，在12～48 h内N基因mRNA转录水平差异显著（P<0.05）、N蛋白表达水平均提高，TCID₅₀在24和48 h差异显著（P<0.05）。本研究构建了Vero-pAPN细胞系，pAPN在Vero细胞中过表达能够促进PEDV复制，该细胞系可作为疫苗高效生产和临床样本分离的候选细胞系。

以哺乳动物细胞HEK-293F表达猪伪狂犬病病毒(pseudorabies virus, PRV)gD重组蛋白作为包被抗原，采用棋盘滴定法优化确定出间接法gD-ELISA(gD-iELISA)各项技术参数；用gD-iELISA检测211份临床猪血清的抗体水平并分析与中和抗体水平的一致关系。结果显示，抗原包被质量浓度为0.90 mg/L;待检血清1∶100稀释，37℃孵育30 min;山羊抗猪IgG-HRP抗体1∶55 000稀释，37℃孵育30 min; TMB底物37℃显色20 min。gD-iELISA能检出1∶6 400稀释的PRV阳性血清；用gD-iELISA检测CSFV、PRRSV、PCV-2、PEDV和FMDV阳性血清其结果均呈阴性，该方法与以上阳性血清不存在交叉反应；gD-iELISA与商品试剂盒阴阳性血清的符合率为95.26%,批内和批间变异系数均低于10%。相关性分析表明，gD抗体水平与中和抗体效价的相关系数(r)显著大于gB抗体水平的相关性，并且gD抗体水平与中和抗体效价有很好的线性关系。结果表明，gD-iELISA比gB-iELISA更适用于PRV的疫苗免疫评估。因此，该方法在PRV的免疫防控中将会有很好的应用前景。

为探究泛素特异性蛋白酶47(ubiquitin-specific protease 47,USP47)对狂犬病病毒(rabies virus, RABV)感染小鼠神经母细胞瘤细胞(Neuro-2a, N2a)的影响，本研究通过RT-qPCR、免疫印记和病毒滴度测定等技术，检测在N2a细胞中，RABV直接感染对USP47表达水平的影响，然后检测过表达USP47及敲低USP47后RABV核蛋白和磷蛋白基因水平、蛋白水平和上清液病毒滴度的变化。结果显示，RABV感染会引起N2a细胞中USP47转录水平上调。过表达USP47后，RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平均上升，上清中病毒滴度也随之升高，同时白细胞介素6(IL-6)基因水平降低；敲低USP47后，RABV N和RABV P基因和蛋白表达水平降低，上清中病毒滴度也相应降低，IL-6基因水平升高。结果表明，USP47可促进RABV感染，抑制IL-6的表达。这一发现为深入研究USP47调控RABV感染的分子机制打下了基础。

为建立高效检测牛结节性皮肤病病毒(lumpy skin disease virus, LSDV)的血清学方法，本研究设计优化LSDV RNA聚合酶30亚基(RPO30)蛋白的密码子，构建其原核表达质粒pET-25b-RPO30,并进行诱导表达和阴离子纯化。纯化后的RPO30蛋白可以被LSDV的阳性血清识别，具有良好的反应原性。用纯化的RPO30蛋白免疫BALB/c小鼠，并将免疫小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合，筛选到能够稳定分泌抗体且具有竞争效果的杂交瘤细胞株1H1。以重组RPO30蛋白为包被抗原，经反应条件的优化，建立了基于RPO30蛋白的竞争ELISA(cELISA)抗体检测方法。本研究建立的cELISA检测方法的最适抗原包被质量浓度为1 mg/L,用含5%牛血清白蛋白(BSA)的PBST作为封闭液37℃孵育2 h,待测血清的最适稀释度为1∶2,1H1抗体稀释度为1∶2 000,兔抗鼠HRP-IgG稀释度为1∶4 000,最佳显色条件是37℃反应15 min。当检测样品的1-S/P≥0.55,判定结果为阳性；当检测样品的1-S/P<0.55,判定结果为阴性。利用该方法检测了LSDV、牛传染性鼻支气管炎病毒(IBRV)、牛支原体(M.bovis)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛布鲁杆菌(B.abortus)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清，结果显示除了LSDV检测结果阳性外，其他病原的检测结果都是阴性，说明本方法特异性强。利用本试验建立的cELISA检测有免疫背景的临床血清200份，结果显示，其可用于临床疫苗免疫效果的评估。本研究基于重组RPO30蛋白建立的cELISA方法操作简单、特异性强、敏感性高、重复性好，为LSDV的检测和预防提供了可靠的技术支持。

非洲猪瘟是对全球养猪业危害最严重的病毒性传染病，目前尚无有效疫苗。p54蛋白是非洲猪瘟病毒(ASFV)的重要结构蛋白之一，参与病毒的吸附和侵入，是非洲猪瘟血清学诊断的重要靶标之一。本研究采用无标签的重组p54蛋白作为包被抗原，建立了ASFV p54间接ELISA抗体检测方法，优化了检测条件，组装成了试剂盒。根据对374份阴性猪血清的检测，确定了本试剂盒检测的临界值，并利用不同猪病原阳性质控血清进行了敏感性、特异性和稳定性研究。结果显示，本方法检测阴/阳性血清的临界值为0.250;敏感性血清质控品的最小检出限为1∶1 600倍，与ASFV阳性血清、猪伪狂犬病病毒阳性血清、猪繁殖与呼吸病毒综合征病毒阳性血清、猪圆环病毒2型阳性血清、猪细小病毒阳性血清和猪抗大肠杆菌阳性血清等6种特异性质控血清均无交叉反应；试制的3批试剂盒批间和批内变异系数均小于10%。试剂盒在2～8℃贮存9个月，特异性、敏感性保持不变。以上试验结果表明，本试剂盒具有良好的敏感性、特异性和稳定性，与OIE推荐的p72阻断ELISA抗体检测试剂盒具有较高符合率，为非洲猪瘟临床血清学诊断和抗体监测提供了良好的技术支持。

为了解新疆地区马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi,S.equi)分离株XJ 5012的基因组特征，探究其毒力及进化、耐药表型及耐药基因型的相关性，为马腺疫的有效防控提供理论依据。本研究对S.equi XJ 5012进行了全基因组测序，对获得的测序序列进行16S rRNA进化、SeM基因分型、耐药基因及毒力基因的比较与分析，并对其进行了抗菌药物敏感性试验。药敏试验结果表明，该菌对阿莫西林、氨苄西林、头孢呋辛、头孢噻呋、头孢西丁、链霉素、红霉素、土霉素、左氧氟沙星、诺氟沙星、环丙沙星、利福平、克林霉素、磺胺嘧啶钠共14种抗菌药物敏感，对青霉素、庆大霉素、克拉霉素、多西环素、四环素、恩诺沙星共6种抗菌药物耐药。全基因组测序结果表明，S.equi XJ 5012基因组大小为2.21 Mb, GC含量为41.31%,含有2 264个编码基因。耐药基因数据库注释分析的结果显示，该菌株携带有135个耐药相关基因，且耐药基因主要分为大环内脂类、喹诺酮类、氨基糖苷类、多肽类、四环素和β-内酰胺类抗生素耐药基因，耐药基因的携带情况与药敏试验验结果具有明显的一致性。毒力基因数据库注释显示该菌株携带197个毒力相关基因，主要包括黏附、抗吞噬、胞外酶、分泌、铁摄取等毒力基因。基于16S rRNA基因构建系统发育树显示菌株XJ 5012与S.equi 4047亲缘关系最近；基于SeM基因分型分析结果显示S.equi XJ 5012为SeM-217,该基因型与新疆地区分离株的SeM-209、SeM-215及国外分离株的SeM-195和SeM-196亲缘关系较近。本研究利用第3代测序技术对XJ 5012基因组进行深度测序分析，为更全面深入地认识该菌的基因组、分子流行特征及耐药性提供了参考，并为今后S.equi感染的防控及致病机制研究奠定试验基础。

为探究新疆某集约化牛场1～6月龄犊牛群中牛副流感病毒3型(BPIV3)的感染情况，对采集的60份犊牛鼻拭子样品进行RT-PCR检测、病毒分离鉴定及全基因组测序和遗传进化分析。结果显示，样品中BPIV3核酸阳性率为11.67%。从核酸阳性样品中分离获得1株BPIV3,并命名为XJ21032-1(45),其基因组全长为15 512 bp;遗传进化分析表明，XJ21032-1(45)属于BPIV3 B基因型，该分离株与澳大利亚的BPIV3 B基因型参考株Q5592(EU277658)的同源性最高为93.4%。本研究成功分离得到了1株B基因型BPIV3,证实B型毒株在我国的存在和流行，为BPIV3疫苗研发提供了原材料，也有助于我国BPIV3分子进化规律及溯源的进一步研究。

通过原核表达系统制备、纯化布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗核心组分BCSP31蛋白，并将其作为免疫原及标准品分别免疫新西兰大白兔(1 mg/只)和BALB/c鼠(200μg/只)制备兔源捕获多克隆抗体和鼠源检测多克隆抗体，对双抗夹心ELISA方法的捕获抗体和检测抗体最佳稀释倍数、封闭液种类及封闭条件、酶标二抗工作条件等参数进行优化，结果显示兔多克隆抗体最佳包被浓度和鼠多克隆抗体最佳稀释倍数均为1∶1 600、3%脱脂奶粉封闭1 h、酶标二抗最佳稀释倍数为1∶4 000、酶标二抗孵育时间1 h、显色时间为15 min的条件下建立的双抗夹心ELISA方法效果最好。按照上述最佳反应条件对布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗(BCSP31-cVLPs)核心抗原成分BCSP31蛋白进行定量检测，并对其敏感性、特异性、重复性等性能进行评价，结果显示1μL布鲁菌嵌合病毒样颗粒中的BCSP31含量约占总蛋白含量的14.187%;将布鲁菌嵌合病毒样颗粒稀释640倍后，P/N值仍大于2.1,有较高的敏感性；与FAdV、IBDV、NDV、AIV等其他病毒样颗粒均无交叉反应，特异性高；批间和批内变异系数均在10%以下，重复性良好。该方法的建立为推进布鲁菌嵌合病毒样颗粒疫苗的质量控制标准建立及商品化奠定了基础。

为了研究3羟基3甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCR)对脂肪肝奶牛肝脏胆汁酸(BAs)及脂质代谢机制，本研究通过分离原代犊牛肝细胞并利用高浓度非酯化脂肪酸(NEFA)处理体外构建肝脂蓄积模型，然后加入HMGCR过表达腺病毒(Ad-HMGCR)及过表达腺病毒对照(Ad-GFP)。利用试剂盒检测了肝细胞甘油三酯(TAG),脂滴荧光检测脂滴变化，及实时荧光定量PCR检测BAs合成和脂肪酸合成及氧化因子变化。结果显示，与Ad-GFP+NEFA组相比，Ad-HMGCR+NEFA组的TAG含量及脂滴荧光显著减少。实时荧光定量PCR结果显示，Ad-HMGCR+NEFA组肝细胞BAs合成因子CYP7A1、CYP8B1、CYP7B1和CYP27A1,BAs转运因子ABCC2和ABCB11及脂肪酸合成因子ACC1、FAS和SREBP1C显著低于Ad-GFP+NEFA组；Ad-HMGCR+NEFA组调控肝细胞BAs合成因子FXR及脂氧化因子CPT1A的水平高于Ad-GFP+NEFA组。结果表明，HMGCR过表达可显著减轻脂肪肝奶牛肝脏BAs和脂滴蓄积。

从我国吉林地区患有肺炎的病猪分离到优势菌株，对分离菌株进行16S rRNA鉴定，确定为副猪链球菌(Streptococcus parasuis,S.parasuis),命名为WYF-8B。药敏纸片扩散法检测结果显示，WYF-8B对杆菌肽、磺胺间甲氧苄啶、林可霉素、红霉素、磷霉素、阿奇霉素、青霉素、多西环素、复方新诺明、磺胺异恶唑、环丙沙星、恩诺沙星、四环素、苯唑西林、庆大霉素、头孢唑林、氨苄西林均耐药；对氟苯尼考，氯霉素高度敏感。生化鉴定结果显示，WYF-8B可发酵水杨酸、麦芽糖、乳糖、蔗糖、七叶苷、葡萄糖；不发酵甘露醇、尿素、棉子糖、木糖、阿拉伯糖、山梨醇。利用第二代全基因组测序技术对WYF-8B耐药基因型进行研究，结果发现其携带对大环内酯类抗生素的抗性基因Mef(E)、ErmB,对β-内酰胺类抗生素的抗性基因pbp2b、pbp1a、pbp2x,对氟喹诺酮类抗生素的抗性基因gyrA、parC、grlB,对氨基糖苷类抗生素的抗性基因ANT(6)-Ia、AAC(6')-Ie-APH(2'')-Ia、ANT(9)-Ia、APH(3')-Ⅲa,对林可酰胺类抗生素的抗性基lnuB、lmrC、lmrD,对四环素类抗生素的抗性基因tetM,对杆菌肽的抗性基因bcrA,结果显示耐药表型与测序结果的耐药基因型相符。WYF-8B毒力因子研究结果显示，WYF-8B共携带13个毒力因子(pavA、fbp54、clpP、cps4I、wbtB、cpsI、tufA、galE、hasC、groEL、wbtL、gndA、wbtF),其作用机制主要为促进细菌的扩散、转移、定居、抗吞噬及不被宿主免疫细胞识别等。药物敏感试验结果为研究副猪链球菌的临床用药提供参考，耐药表型与毒力因子为新型药物及疫苗的研发奠定基础。

真核细胞受到氧化应激、热休克或病毒感染等外界不利因素刺激时，会迅速启动细胞应激反应，停滞自身翻译，导致大量应激颗粒(stress granules, SGs)的产生，使细胞处于自我保护的休眠状态。SGs是一种动态、无膜的蛋白-RNA聚集物，在维持细胞内环境稳态、调控宿主基因表达的过程中发挥重要作用。SGs在抵抗病毒复制过程中也发挥重要作用，既可以停滞宿主蛋白翻译系统避免病毒“劫持”,也能够招募天然免疫相关的宿主因子，共同抵抗病毒复制。然而，病毒在长期进化中已经具备多种逃逸SGs抗病毒的策略，以便为自身复制提供更好的细胞内环境。因此，对SGs产生、抗病毒机制以及病毒进化过程中逃逸SGs抗病毒的策略进行综述，以期为抗病毒药物的研发提供新的视角。

为实现猪轮状病毒(porcine rotavirus, PoRV)的快速检测，本研究将重组酶聚合酶等温扩增(recombinase aided amplification, RAA)与侧流层析试纸条(lateral flow dipstick, LFD)技术结合，根据PoRV VP6基因保守序列，设计特异性引物和探针，构建并优化扩增体系，建立了基于RAA-LFD的PoRV一步法快速检测方法，并对检验该方法的特异性、敏感性、重复性及临床应用进行了评价。结果显示，该方法在37℃恒温反应15 min即可实现对PoRV核酸的扩增，最低检出限为22.3拷贝/μL,与其他常见病毒性腹泻病毒均无交叉反应，RT-RAA-LFD与RT-PCR检测方法总符合率为97.0%,Kappa系数为0.93(K>0.75)。本试验建立的RT-RAA-LFD检测方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性，并具备快速、可视化和适合现场快检等特点，为PoRV快速诊断和流行病学调查提供了新的技术手段。

为实现鸭甲型肝炎病毒3型（DHAV-3）的快速检测，本试验首先对DHAV-3的非结构蛋白3D进行原核表达，纯化后免疫BALB/c小鼠，四免后取小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞（SP2/0）融合制备单克隆抗体，进而利用单克隆抗体建立双抗夹心ELISA（DAS-ELISA）检测方法，评估其灵敏性、特异性和重复性，最后将所建方法应用于临床样本的检测，并与RT-PCR方法进行符合性验证。结果显示：DHAV-3 3D蛋白在BL21（DE3）中高效表达，经Western blot验证，纯化后的蛋白其特异性良好；细胞融合后经3次亚克隆，成功筛选到6株杂交瘤细胞，分别命名为1A3、1B6、1C7、1D9、2A1和3A9,抗体亚型鉴定结果显示1A3为IgG2b, 1B6为IgG2a, 3A9为IgG3,1C7、1D9和2A1均为IgG1;经筛选，将1B6和1A3两株亲和性高的单抗分别作为捕获抗体与检测抗体，建立DAS-ELISA检测方法，优化反应条件后确定捕获抗体1B6最佳包被质量浓度为1×10^-3 g/L,检测抗体1A3的最佳稀释度为1∶1 000,阴阳临界值（cut-off）为0.256;灵敏性试验显示该方法对3D蛋白的最低检测限度为4.0×10^-4 g/L;重复性试验显示，该方法批内、批间变异系数（Cv）均小于9%,重复性好；特异性试验显示，该方法对鸭腺病毒（DAdV）、番鸭细小病毒（MDPV）、鸭圆环病毒（DuCV）、鸭瘟病毒（DPV）、鸭呼肠孤病毒（DRV）、鸭疫里默氏杆菌（RA）病原无特异性反应，但与鸭甲型肝炎病毒1型（DHAV-1）具有交叉反应，可以同时检测出DHAV-3与DHAV-1病原；应用该试验建立的DAS-ELISA方法与RT-PCR检测方法同时对186份临床样本进行检测，DAS-ELISA方法可同时识别DHAV-1和DHAV-3,且与RT-PCR检测方法的符合率为98.9%。结果表明，本试验建立的DAS-ELISA方法重复性好、灵敏性高，可用于DHAV-1与DHAV-3的诊断，为我国鸭甲型肝炎的流行病学调查及防控提供了技术支撑。

为了解青藏高原牦牛源肠球菌流行情况及其耐药性、毒力基因特点、生物被膜黏附能力情况，从青藏高原4省区(西藏自治区、四川省、甘肃省、青海省)采集新鲜牦牛粪样346份，奶样311份，共计657份，对其进行细菌分离鉴定，16S rDNA基因检测并构建系统进化树。使用PCR方法对分离菌株进行耐药、毒力基因检测，利用18种抗菌药物进行药敏试验；采用改良半定量结晶紫染色法确定分离菌株生物被膜黏附能力。结果显示，肠球菌总分离率为32.27%,其中四川省最高，达60.23%,其次甘肃省、青海省和西藏自治区，分别为42.70%、23.47%和18.31%。从样品种类来看，粪样分离率为36.71%,奶样为27.33%。经PCR扩增得到约1 400 bp目的条带，选取5株菌株进化分析单独聚成一簇。212株分离菌对克林霉素、庆大霉素、利奈唑胺、利福平、链霉素产生较高耐药性，并存在多种耐药现象，占60.85%。12种耐药基因只有5种被检测出，分别为erm(B)、tet(L)、tet(O)、tet(M)和ant(6)-Ia。13种毒力基因均有在肠球菌中检测出，其中cpd检出率为95.75%,gelE为91.98%,efaA为86.79%,asal为86.32%,其余的在5.19%～55.66%之间。而奶源肠球菌中暂未检测出fsr毒力基因。分离菌中强黏附能力占3.30%,弱黏附能力占48.58%,无黏附能力占48.11%。综上研究揭示了牦牛源肠球菌流行情况、耐药基因和毒力基因携带情况、生物被膜表型相关性，为掌握青藏高原牦牛源肠球菌研究数据奠定了基础。

为建立牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3)血清学检测方法，本试验对BPIV3的HN、NP、F、P蛋白进行原核表达、纯化，筛选最适蛋白包被抗原，建立间接ELISA检测方法。结果显示，成功表达了BPIV3的4种重组蛋白rHN、rNP、rF和rP;棋盘滴定结果显示，rHN蛋白作为包被蛋白具有最高的P/N值，因此用于后续方法建立。摸索间接ELISA的最适反应条件：抗原包被质量浓度为0.5 mg/L,37℃1.5 h; 5%脱脂牛奶，4℃过夜封闭；血清1∶50稀释，37℃孵育1 h;二抗稀释度为1∶10 000,37℃孵育0.5 h;底物反应条件为37℃12 min。特异性试验结果显示，所建立的方法能够特异性识别BPIV3抗体阳性血清，且灵敏度达到1∶800,批内与批间重复性的检测中变异系数均小于10%,与SVANOVIR试剂盒检测同一批样品的总符合率为92.22%。应用该方法对河北地区192份血清样品进行检测，血清中BPIV3抗体阳性率为66.15%。结果表明，本试验构建的BPIV3抗体间接ELISA检测方法适用于临床大规模血清学调查。

2022年12月至2023年12月期间，在全国采集2 560份拭子样品，利用PCR方法对猫博卡病毒(feline bocavirus, FBoV)进行检测并扩增其NS1及VP2基因编码序列；同时，利用生物信息学方法分析FBoV的遗传多样性。结果显示，FBoV的总阳性率为4.6%(119/2 560),共在8个省或直辖市的样品中检出FBoV,疾病呈区域性流行特点；基因遗传进化分析结果显示，FBoV以多种基因型存在，我国主要以FBoV-1型流行为主，本研究鉴定的15株FBoV-1型毒株、4株FBoV-2型毒株、1株FBoV-3型毒株与中国、美国、泰国、澳大利亚、葡萄牙所鉴定的毒株遗传距离较近；同源性分析结果显示，各测序毒株与参考毒株间NS1及VP2基因氨基酸同源性分别为60.40%～99.20%和67.20%～100%,各测序毒株之间NS1及VP2氨基酸同源性分别为60.60%～100%和67.80%～100%,结果表明，我国流行的FBoV毒株具有明显的遗传多样性。本研究为阐明我国FBoV的流行现状充实了资料，并为后续针对FBoV的诊断或防控提供了流行病学调查基础。

收集免疫反应较强的中间宿主羊细粒棘球绦虫感染阳性血清，以健康血清为阴性对照，纯化该血清与靶标蛋白经免疫沉淀捕获和富集相应的抗原，获得靶标蛋白-抗体-目的蛋白复合物。联合质谱策略筛选与鉴定细粒棘球绦虫相关特异性抗原，利用在线预测软件对肽段覆盖率最高的蛋白进行生物信息学分析。结果显示，IP-MS鉴定得到133种细粒棘球绦虫相关蛋白，其中肽段覆盖率≥70%的有1种蛋白，为肌动蛋白；肽段覆盖率为30%～40%的有3种蛋白，分别为含Ton B结构域蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1 α亚复合物2、乳酸脱氢酶；肽段覆盖率为20%～30%的有6种蛋白，分别为剪接因子3b亚基5、肿瘤蛋白D52、表达的保守蛋白、NADH脱氢酶(泛醌)1α亚复合物7、肌苷-5′-单磷酸脱氢酶和醛酮还原酶家族1成员B4。生物信息学分析显示，肌动蛋白无信号肽，可能为非分泌型蛋白，亚细胞定位在细胞骨架，存在6个最佳潜在抗原表位，二级结构和三级结构一致以α螺旋和无规则卷曲为主。结果表明，免疫沉淀-质普联用技术是筛选和鉴定细粒棘球绦虫抗原的一种高通量、简便、快速有效的方法，可为筛选中间宿主羊血清诊断标识的特异分子及包虫病新型诊断技术的研发提供依据。

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)是一种常见的革兰阳性厌氧条件致病菌，在自然界中广泛存在，可引起腹泻、气性坏疽等疾病。临床上采用抗生素治疗产气荚膜梭菌感染，但细菌会通过突变、耐药质粒传播等方式产生耐药性，使产气荚膜梭菌在抗生素的环境压力下得以存活。因此寻找和开发新制剂来替代抗生素或作为饲料添加剂以定向清除机体携带的产气荚膜梭菌或预防感染是十分重要的。本研究从污水中分离得到了一株产气荚膜梭菌烈性噬菌体vB＿CPP＿AT。利用透射电镜观察噬菌体形态，通过裂解谱、MOI、酸碱及温度耐受性等分析该产气荚膜梭菌噬菌体基本生物学特性。研究发现vB＿CPP＿AT噬菌体为短尾噬菌体，在60 min时呈暴发式增长，最佳MOI为0.1,专一性裂解产气荚膜梭菌，裂解率为40%(8/20),与参试的其他细菌不发生裂解反应，具有良好的热稳定及酸碱耐受性。vB＿CPP＿AT噬菌体基因组为双链DNA,全长16 790 bp,具有20个开放阅读框。基因组分析vB＿CPP＿AT噬菌体为1株新的产气荚膜梭菌烈性噬菌体。该结果为噬菌体vB＿CPP＿AT应用于产气荚膜梭菌的临床治疗奠定了基础。

为了解致贵州省某鸡场幼鸡死亡的传染性法氏囊病毒(infectious bursal disease virus, IBDV)GZGY2022分离株的基因组特征、遗传变异及毒株类型，本试验设计引物对其进行全基因组的扩增、克隆、测序，遗传演化和毒株类型分析。结果显示，扩增IBDV全基因组的A、B片段分别为3 260、2 827 bp,分别编码VP2～VP5、VP1基因。该毒株A、B片段与VvIBDV毒株核苷酸序列同源性分别为96.2%～98.7%、87.7%～98.9%,均与NN1172株同源性最高，与其他毒株同源性分别为83.1%～94.7%、90.1%～91.0%。遗传演化及毒株类型结果显示，IBDV毒株按抗原及毒力主要分为6个分支，该毒株A、B片段均聚类在VvIBDV分支，根据新基因型分类方法，该毒株为A3B3基因型。氨基酸序列分析结果表明，该毒株A、B片段分别有3、7处独有的氨基酸位点变异，全基因组编码区与超强毒株有13处一致且独有的特征性氨基酸位点。A片段的VP2序列与超强毒株有19处相同的特征氨基酸，其中高变区222A、242I、253Q、256I、279D、284A、294I、299S是超强毒株的特征性的氨基酸位点，七肽区序列SWSASGS与强毒株一致；B片段的VP1序列与超强毒株有10处相同的特征氨基酸，其中61I、145T、287A是超强毒株的特征性的氨基酸位点，777～782核苷酸序列为GGTGCC,未能形成KpnⅠ限制性内切酶位点，结合三联体位点145/146/147(TEG),则B片段与NN1172株一致，其毒力稍弱于B2型VvIBDV毒株。重组分析结果显示，该毒株序列无断裂和重组位点，未发生重组事件。结果表明，GZGY2022株属于A3B3型非重组超强毒株，特殊氨基酸位点均与VvIBDV分子特征相符。

为建立一种非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)抗体间接ELISA检测方法，利用马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)介导的植物生物反应器在本氏烟草中表达ASFV p30蛋白，并以表达的蛋白作为包被抗原，对间接ELISA各反应条件进行优化。依据ASFV SY-18株的CP204L(p30)基因序列，按照本氏烟草密码子的偏好性，对p30基因(231～536 bp)的核苷酸序列进行优化、人工合成及克隆，通过In-Fusion连接技术将扩增的p30基因插入到PVY基因组的P1和HC-Pro基因之间，构建PVY-p30重组病毒质粒，以摩擦的方式将质粒接种本氏烟草叶片，14 d后，通过RT-PCR和Western blot分析目的基因的转录和重组蛋白的表达情况，并利用Ni-NTA-琼脂糖亲和层析柱纯化本氏烟草中表达的p30重组蛋白，Western blot分析p30重组蛋白的纯化效果和反应原性，将纯化后的p30重组蛋白作为包被抗原，建立ASFV抗体间接ELISA检测方法。结果显示，构建的PVY-p30重组病毒能够系统性侵染本氏烟草；p30重组蛋白能够在本氏烟草叶片中表达，且具有良好的反应原性；纯化的p30重组蛋白效果较好，能够被p30蛋白单克隆抗体识别。建立的ELISA检测方法最佳反应条件为抗原质量浓度0.5 mg/L,37℃包被1 h;待检血清1∶400倍稀释，37℃孵育0.5 h; HRP标记二抗37℃孵育0.5 h; TMB室温避光显色10 min;阴阳性临界值为0.461。当ASFV阳性血清稀释度为1∶2 560时，仍检测为阳性，具有较高的敏感性；该方法与其他常见病阳性血清不发生交叉反应，能够特异性地检测ASFV抗体；重复性试验显示批内变异系数小于5%,批间变异系数小于10%;该方法与ASFV商品化检测试剂盒相比，总体符合率为85.0%。结果表明，本研究构建的PVY-p30重组病毒载体能介导p30重组蛋白在本氏烟草中表达，以植物表达的p30重组蛋白为抗原建立的ASFV抗体间接ELISA检测方法可用于疾病的临床检测及疫情监测，同时为可饲疫苗的研发提供了基础材料。

为建立1种禽脑脊髓炎病毒(avian encephalomyelitis virus, AEV)抗体检测方法，试验对AEV VP1蛋白进行截短表达，以表达蛋白为包被抗原建立检测AEV抗体的间接ELISA方法。结果显示，重组VP1蛋白以包涵体形式表达，大小为34 kDa;可与AEV阳性血清发生特异性反应；以VP1蛋白为包被抗原建立的间接ELISA方法检测ALV、IBDV、IBV、ILTV、NDV、AIV-H9阳性血清均为阴性；检测AEV抗体的最低检出效价为1∶51 200;与IDEXX试剂盒的符合率为95.24%;检测新疆地区1 127份AEV疫苗免疫鸡血清样品和879份未免疫鸡血清样品的免疫抗体阳性率和感染抗体阳性率分别为88.91%和8.19%。结果表明，建立的间接ELISA方法特异、敏感、准确，可用于临床中免疫抗体和野毒感染抗体的检测和筛查。

为预测草原革蜱在新疆地区的分布点和适生区情况及了解其实验室条件下生活周期史，本研究使用最大熵(maximum entropy modeling, MaxEnt)模型对草原革蜱在新疆地区的地理分布以及适应区进行预测，并使用刀切法(jackknife test)及环境变量响应曲线评估影响草原革蜱分布的环境因子。根据预测的地点随机采集革蜱样本，利用形态学特征及分子生物学相结合方法鉴定革蜱种类。以新西兰大白兔为唯一供血动物，在实验室自然光照条件下采用耳套饲养法进行人工饲养，观察记录该蜱的生活史周期及生物学特性。使用刀切法检验及SPSS分析结果显示，影响草原革蜱适生区分布的主要环境变量因子为平均温度(Bio1)、均气温日较差(Bio2)、温度季节性变化(Bio4)、最干旱月降水量(Bio14)、降水量变异系数(Bio15)、最冷季度降水量(Bio19)。主要环境变量因子响应曲线结果显示，草原革蜱在Bio1为15.58℃、Bio2为6.19℃、Bio4的变异系数为1 500、Bio14为20 mm、Bio15的变异系数为23.799、Bio19为69 mm时存在概率最大。适生区预测结果显示，新疆草原革蜱适生区为准噶尔盆地、天山山脉及山间谷地、阿尔泰山、吐鲁番盆地、以及天山山脉以南部分地区，占新疆总面积的50.99%。根据MaxEnt模型预测地区采集革蜱，通过形态学结合分子生物学方法鉴定为草原革蜱；幼蜱饱血期为5.31 d,蜕化期为8.19 d,蜕化率达到95.5%;若蜱饱血期为8.65 d,蜕化期为12.86 d,蜕化率达到98%;成蜱饱血期为6.75 d,饱血雌蜱产卵前期为5.86 d,饱血雌蜱产卵期为12.5 d;蜱卵经25.92 d孵化为幼蜱，孵化率达到90%;草原革蜱在实验室条件下完成一个生活史需62～10 d,平均需86.0 d。所构建的MaxEnt模型具有较高的预测精度和准确性，根据主要环境因子变量分析，降水量和温度是影响草原革蜱的主要环境因子。本试验研究为新疆优势蜱种-草原革蜱的危害评估、建立实验室人工饲养纯种蜱体系及当地蜱传疾病的综合防控奠定了基础。

为了分析黏菌素体外诱导肠炎沙门菌耐药的主要耐药机制。本研究针对肠炎沙门菌CMCC(B)50335(ZK),通过体外诱导其对黏菌素耐药，并采用比浊法、半固体琼脂法、透射电镜、纸片扩散法测定诱导前后生长特性、运动能力、超微结构及对16种抗菌药物敏感性变化，Illumina NovaSeq PE150法检测其全基因组及单核苷酸多态性(SNP),RT-qPCR检测6种耐药相关基因表达量差异，Red大肠杆菌同源重组法构建诱导耐药株E1-128-1的phoP基因重组株△phoPE1-128-1,并检测对黏菌素的敏感性变化。结果表明，筛选出3株诱导耐药菌E1-128-1、E1-128-3、E2-128-3,耐药稳定性检测后最小抑菌浓度(minimal inhibit concentration, MIC)分别升高128、64、64倍；诱导耐药对受试菌生长能力及16种抗菌药物敏感性无显著性影响，E1-128-1运动能力显著升高，细胞壁及质膜明显增厚；诱导前后E1-128-1基因组组分无明显差异，但检测出phoP/phoQ、cpxP、lptD、csrA、acrB等6个耐药相关基因的8个错义突变，包括phoP错义突变位点4个，分别为Leu185Trp、His189Ser、Thr190Tyr和Ile191His,对相应基因进行PCR测序，结果与SNP结果相符；RT-qPCR结果表明3株诱导菌突变基因表达量均显著性上升；△phoPE1-128-1的黏菌素MIC值较E1-128-1下降至1 mg/L。提示phoP基因突变及表达量升高是体外诱导沙门菌CMCC(B)50335多黏菌素耐药的重要因素。

非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)感染家猪和野猪而引起的一种烈性传染病。ASFV在欧洲暴发流行过程中，已演化出无红细胞吸附特性的弱毒株。2018年，基因Ⅱ型ASFV强毒株传入我国后，相继出现了基因Ⅱ型弱毒株、基因Ⅰ型弱毒株以及基因Ⅰ型和Ⅱ型重组的ASFV强毒株。这表明ASFV在流行过程中出现了复杂、多样的遗传演化，给疫苗研发和疫病的监测带来了严峻的挑战。本文首先对ASFV在我国和全球流行的新特点进行了总结；重点分析了ASFV在流行过程中的遗传变异和致病性的改变；在此基础上，探讨了ASFV遗传变异对病毒免疫逃逸和致病性的影响，以及对疫苗研发、疫病检测和监测带来的挑战；旨在加深对ASFV遗传演化规律与变异机制的认知，从而为疫苗和诊断技术研究提供理论依据。

为了鉴别临床上以繁殖障碍及流产为特征的病毒性疫病，本研究建立了同时检测猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪细小病毒（PPV）、猪圆环病毒2型（PCV2）和非洲猪瘟病毒（ASFV）的四重qPCR方法，根据NCBI基因库中4种病毒保守基因设计4对特异性引物和探针，对反应的退火温度、引物浓度和探针浓度进行优化，并检验该方法的特异性、敏感性和重复性。结果显示：该方法不能检测到除目的病原以外的其他病原；对PRV、PPV、PCV2和ASFV 4种病原的最低检测限均为10拷贝；组内和组间重复性试验显示不同批次试验间C_t值变异系数均小于3%,说明该方法具有高度特异性、敏感性和稳定性。以上试验结果证明，本研究建立了高效灵敏的四重qPCR方法，为临床上猪伪狂犬病毒病、猪圆环病毒病、猪细小病毒病和非洲猪瘟的防控提供技术参考。

通过RT-PCR方法从基因Ⅰ型（GⅠ）日本脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）GX株中扩增覆盖全长cDNA的3段基因片段，将3个基因片段依次克隆到pBR322载体上以获得感染性克隆质粒pGX,测序正确后将该感染性克隆质粒与pCAGGS-T₇ 聚合酶真核表达质粒共转染至BHK-21细胞中进行病毒的拯救。间接免疫荧光和噬斑试验结果显示，成功拯救GⅠJEV rGX;噬斑试验和小鼠感染试验结果显示，拯救的病毒rGX与野生型病毒GX具有相似的复制能力与致病性。结果表明，成功构建了GⅠJEV GX毒株感染性克隆。

从污水中分离出1株沙门菌裂解性噬菌体PJN025,测定其生物学特性和全基因组序列，并评估其在动物感染模型中的治疗潜力。透射电镜观测结果显示，其属于Caudoviricetes科。PJN025仅裂解鼠伤寒沙门菌和肠炎沙门菌，潜伏期约10 min,暴发期80 min,暴发量约为132 PFU/细胞，表明噬菌体能够高效杀菌；噬菌体的稳定性良好，在30～70℃之间和pH3～12范围内保持稳定。全基因组测序显示，该噬菌体基因组全长为46 478 bp, G+C含量为45.9%,包含82个开放阅读框和1个tRNA,未检测到已知的毒力基因或耐药基因。使用足部注射的方式对大蜡螟幼虫进行鼠伤寒沙门菌的攻毒，48 h时细菌攻毒的阳性对照组的存活率是5%,使用1×10～8 PFU/mL的PJN025噬菌体后，预防组的疗效最好，存活率可提高至70%;使用腹腔注射的方式对SPF小鼠进行鼠伤寒沙门菌的攻毒，5 d时细菌攻毒的阳性对照组中的小鼠全部死亡，使用1×10～8 PFU/mL的PJN025噬菌体后，共感染组的疗效最好，存活率可提高至60%,表明噬菌体的使用能够提高受试动物的存活率。结果表明，噬菌体PJN025特异性强、裂解效率高、对酸碱耐受性较好、耐热性强，安全性和预防效果好，为后续噬菌体产品的研制提供了材料和实验基础。

运用生物信息技术分析FliC_EcN的结构和潜在的抗原表位；借助ClonExpress^?同源重组技术设计引物，缺失FliC_EcN高变区不同结构域，并克隆至pET-28a（+）表达载体中表达，经SDS-PAGE和Western blot鉴定鞭毛蛋白变体；采用鲎试剂显色法检测鞭毛蛋白变体中内毒素残留，并使用不同质量浓度的鞭毛蛋白变体刺激Caco-2细胞，通过检测IL-8的分泌水平来评估各鞭毛蛋白变体的生物学活性。生物信息分析结果显示，FliC_EcN高变区的多数结构域被预测为含有潜在的抗原表位；PCR结果显示，fliC_{△820～1 518}、fliC_△736～963、fliC_{△985～1 200}、fliC_△748～828、fliC_{△1 114～1 191}和fliC_{△1 225～1 311}分别约为1 095、1 566、1 578、1 713、1 716、1 707 bp; SDS-PAGE结果显示，经镍柱纯化处理和透析复性的鞭毛蛋白变体分别约为41.36、57.06、57.50、61.97、61.95、61.56 kDa; Western blot结果显示，6个鞭毛蛋白变体均能与抗His单克隆抗体和大肠杆菌H7抗原诊断血清发生特异性反应；TLR5活性检测结果显示，缺失不同结构域的鞭毛蛋白变体保留了其TLR5激动剂功能。结果表明，本试验成功构建了6种FliC_EcN缺失高变区不同结构域的鞭毛蛋白变体，且各鞭毛蛋白变体均保留了其TLR5激动剂功能，展现了良好的生物学特性，为进一步研究鞭毛蛋白在缺失不同结构域后的佐剂效应以及鞭毛蛋白抗体滴度对其佐剂效应影响提供了参考依据。

利用非洲猪瘟病毒(ASFV)p72蛋白不同抗原表位的2株单克隆抗体，1株作为捕获抗体，另1株用辣根过氧化物酶(HRP)标记后作为检测抗体，采用方阵法对ELISA反应条件进行优化，建立了检测ASFV抗原的双抗体夹心ELISA方法。结果显示，该方法中捕获抗体包被质量浓度为1.25 mg/L,酶标单克隆抗体的最适稀释度为1∶4 000。通过试验确定该方法的临界值为0.299,当样品D_(450)值≥0.3,且P/N大于2时，判定为阳性。该双单抗夹心ELISA方法可特异性检测ASFV抗原，其他抗原检测结果均为阴性，特异性强；重复性好，批内和批间变异系数(CV)均小于8%。应用本研究建立的方法与荧光PCR方法同时对225份临床样品进行检测，总符合率为96.89%。结果表明，本研究建立的双抗体夹心ELISA方法可用于ASFV抗原的大量样品检测，为ASF防控提供了技术支持。

奶牛乳腺纤维化对畜牧业造成巨大的经济损失，上皮细胞间充质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)过程产生的细胞外基质(extracellular matrix, ECM)引发纤维化表型指标升高，是诱导乳腺纤维化病变的主要原因，因此有效缓解上皮细胞EMT过程是缓解乳腺纤维化的潜在防治手段。玉米黄素(zeaxanthin, ZEA)是一种天然类胡萝卜素，研究表明具有缓解EMT过程的生物学功能，并且具有成本相对低廉的优势，但是ZEA对乳腺纤维化的影响及其潜在作用机制尚缺乏研究。因此本试验的目的是探究ZEA对转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)诱导的小鼠乳腺上皮细胞(mice mammary epithelial cells, mMECs)EMT过程中纤维化表型指标的影响及其潜在机制。试验分为5组，空白对照组、ZEA组、TGF-β1模型组、TGF-β1+ZEA(5μmol/L)组、TGF-β1+ZEA(10μmol/L)组。通过CCK8、Western blot和分子动力学模拟等技术探究ZEA对TGF-β1诱导的mMECs纤维化相关指标的影响。结果显示，ZEA显著缓解了TGF-β1诱导的mMECs的纤维化表型指标的升高，具体表现为，E-cadherin蛋白表达显著升高，Collagen 2、α-SMA和Vimentin蛋白表达显著降低。进一步研究表明，ZEA显著抑制TGF-β1/Smad信号通路的激活。综上所述，ZEA通过抑制TGF-β1/Smad信号通路的激活，抑制纤维化表型指标的升高，从而缓解mMECs细胞的EMT过程。

为探究紫锥菊提取物对SD大鼠心肌组织氧化应激的保护作用及相关蛋白表达的影响。选择60只SD大鼠按照随机分组方法分成对照组、不同质量浓度组(10、20、40 mg/kg),每组15只，进行饲养试验。饲养结束后，麻醉并取出心脏，检测心肌组织各生化指标及免疫组织化学染色对心肌组织做病理检测。SD大鼠随着添加紫锥菊提取物浓度增加，SD大鼠氧化应激指标ROS含量和MDA含量呈现逐渐降低的趋势，添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠ROS和MDA显著低于对照组(P<0.05);SD大鼠抗氧化指标SOD、GSH-Px和CAT活性呈现逐渐升高的趋势，添加10、20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠SOD、GSH-Px和CAT显著高于对照组(P<0.05);SD大鼠呼吸链复合体Ⅰ和呼吸链复合体Ⅲ活性呈现逐渐升高的趋势，显著上调线粒体呼吸链复合体Ⅰ、Ⅲ活性(P<0.05);SD大鼠Ca~(2+)-ATP酶呈现逐渐升高的趋势，添加20、40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠Ca~(2+)-ATP酶显著高于对照组(P<0.05)。不同试验组间结果显示，SD大鼠添加40 mg/kg紫锥菊提取物效果最佳。低氧适应基因表达结果显示，与对照组相比，添加10、20和40 mg/kg紫锥菊提取物组SD大鼠HIF-1α、EPO和VEGF的mRNA和蛋白表达差异不显著(P>0.05),但有降低的趋势。结果表明，紫锥菊提取物可通过调控SD大鼠心肌组织代谢，增强其抗氧化能力、线粒体功能、能量代谢水平，提高SD大鼠适应能力，且以SD大鼠添加40 mg/kg紫锥菊提取物作用最佳。

集约化养殖模式造成猪肠道炎症损伤日趋严重，致使小肠上皮屏障功能受损，影响猪群健康度。为研究白屈菜碱(chelidonine)对猪小肠上皮细胞炎症损伤的保护作用，本试验使用H_2O_2构建猪小肠上皮细胞系(IPEC-J2 cells)炎症损伤模型，采用MTT法筛选适宜的白屈菜碱浓度，采用ELISA法检测炎症因子(IL-1β、IL-6、IL-8、IL-10、TNF-α、TGF-β1)以及NO含量，采用qPCR法和Western blot检测上述炎症因子及iNOS的mRNA和蛋白表达水平。结果发现，在2.5～100.0 mg/L质量浓度范围内，白屈菜碱对IPEC-J2细胞无毒性；2.5、5.0、10.0 mg/L白屈菜碱可显著恢复H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞存活率下降(P<0.05)。经H_2O_2造模后，NO含量极显著升高(P<0.01)、IL-10含量显著降低(P<0.05)、其余炎症因子含量显著升高(P<0.05),iNOS及上述炎症因子的mRNA和蛋白表达水平均与ELISA检测结果趋势一致；而3个试验浓度的白屈菜碱均可显著地逆转以上变化。结果表明，白屈菜碱对H_2O_2诱导的IPEC-J2细胞炎症损伤具有显著的预防作用，具备开发成为防治猪肠炎药物的潜力。

帕金森病(Parkinson's disease, PD)是常见的神经退行性疾病，已严重影响老年人的身体健康。为探究芍药苷(peoniflorin)抗帕金森病作用的活性及作用机制，本试验首先建立了1-甲基-4-苯基-吡啶离子(1-methyl-4-phenylpyridinium, MPP~+)诱导PC12帕金森细胞模型。通过细胞形态学观察、检测细胞活性、乳酸脱氢酶(LDH)的释放量、细胞内Ca~(2+)浓度、活性氧(ROS)水平以及细胞凋亡检测，对芍药苷的神经保护作用进行初步的活性评价。再利用1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-tetrahydropyridine, MPTP)致PD小鼠模型为研究对象，通过检测自主活动和滚轴能力表现，对芍药苷抗PD的作用进一步验证。在此基础上，通过Western blot检测相关凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达水平研究其作用机制。结果显示，与正常对照组比较，模型组细胞数量减少，细胞体积明显缩小；细胞活性显著降低(P<0.01);MPP~+显著增加PC12细胞LDH释放率(P<0.01)、ROS水平(P<0.01)和Ca~(2+)浓度(P<0.01),同时细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。与模型组比较，药物保护组细胞损伤减弱，活细胞数量增多，细胞活性增强；25、50μmol/L剂量芍药苷保护组显著降低MPP~+诱导的PC12细胞LDH释放率(P<0.01)、ROS水平(P<0.01)和Ca~(2+)浓度(P<0.01),显著缓解了MPP~+诱导的细胞凋亡(P<0.01);MPTP诱导可显著减少小鼠的自主活动次数(P<0.01)和滚轴时间(P<0.01),经芍药苷预处理后显著增加小鼠自发站立次数(P<0.05)和滚轴时间(P<0.01);25、50μmol/L芍药苷保护组显著增加了细胞内Bcl-2/Bax表达(P<0.01),同时降低了Caspase-3的表达(P<0.01)。结果表明，芍药苷对MPP~+和MPTP诱导帕金森病体内、外模型均具有神经保护作用，其作用机制是通过增加细胞内Bcl-2/Bax表达，降低了Caspase-3的表达实现的。

为建立鉴定5类牛源致泻性大肠埃希菌(DEC)多重PCR检测方法，对陕西关中奶牛场犊牛粪便中分离的大肠埃希菌进行检测。以EAEC(astA、aggR、pic)、EHEC(stx1、stx2)、EPEC(escV、bfpB)、EIEC(invE)和ETEC(lt、stp、sth)5类DEC中11种毒力基因为目标，uidA基因为阳性对照，建立两体系(体系Ⅰ和Ⅱ)多重PCR检测方法，通过改变引物浓度、退火温度等检测条件进行优化，并对其特异性和灵敏度进行检测。结果显示，体系Ⅰ检测EAEC、EHEC,体系Ⅱ检测EPEC、EIEC、ETEC,除astA引物浓度为0.5μmol/L,其余均为0.3～0.4μmol/L;退火温度以59℃最佳；ETEC的检测下限最低(1.09×10~(3 )CFU/mL),其余依次为EHEC(1.27×10~3 CFU/mL)、EIEC(2.43×10~3 CFU/mL)、EPEC(5.71×10~3 CFU/mL)、EAEC(7.98×10~3 CFU/mL);经验证该方法只对DEC毒力基因产生特异性，而对沙门菌、化脓隐秘杆菌、变形杆菌、肺炎克雷伯菌、粪肠球菌、金黄葡萄球菌不产生特异性条带；应用此方法对183株犊牛腹泻源E.coli进行了检测，共检出17株DEC,其中EAEC 6株、ETEC 4株、EPEC 4株、EHEC 2株、EIEC 1株，经单一PCR验证结果一致。本研究建立的检测5类DEC多重PCR方法可对样品采用两体系、同一PCR反应程序进行检测。该方法的建立为牛源DEC中常见毒力基因的检测及分子流行病学调查提供了方法与借鉴。

牛呼吸道疾病(bovine respiratory disease, BRD)是牛场中重要的疾病之一，给我国养牛业造成了严重的经济损失。多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)和溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)是与BRD相关的主要细菌性病原。为分离纯化到目前Pm和Mh流行的优势毒株，建立合适的小动物攻毒模型，给BRD疫苗研制提供有效的疫苗候选株。本研究首先从患BRD牛的病料中进行Pm和Mh的检测、分离鉴定，确定基因型且评估分离株对小鼠的致病性，筛选合适的疫苗候选株。结果显示，本研究在2022年11-12月从我国3个省份的6个牛场采集到48份患有BRD的牛鼻拭子，PCR检测结果显示Pm的检出率为47.9%(95%CI:33.3～62.8),Mh的检出率为37.5%(95%CI:24.0～52.6),Pm/Mh共感染的检出率为18.8%(95%CI:8.9～32.6)。在阳性样本中分离纯化得到12株Pm,经血清型鉴定均为A型多杀性巴氏杆菌(PmA);分离到11株Mh,其中7株为A1型，4株为A6型，且在同一头牛的鼻拭子中同时分离到A1型和A6型的Mh。随后建立PmA和Mh的小鼠感染模型，筛选到PmA和Mh的强毒株分别是PmA GDP001株和Mh GDM019株，并且测定PmA GDP001株对小鼠的LD_(50)为10~(1.1) CFU,Mh GDM019株对小鼠的LD_(50)为10~(8.2) CFU。本研究揭示了我国部分地区牛场中BRD主要细菌性病原的流行病学，分离到了重要的病原(PmA和Mh),并且鉴定了分离株的血清型，且通过小鼠感染致病模型筛选到毒力强的PmA和Mh菌株，为BRD多联多价疫苗的研发提供了良好的疫苗候选株。

为获得免疫原性好的猪丁型冠状病毒(porcine deltacoronavirus, PDCoV)辅助蛋白ns7和ns7a,并制备特异性的多克隆抗体，以用于ns7和ns7a蛋白功能的初步研究，本试验构建原核表达载体pGEX-PDCoV-ns7和pGEX-PDCoV-ns7a,测序正确后转入E.coli BL21(DE3)中诱导表达。利用GST-Resin进行蛋白纯化，将获得的重组蛋白以皮下注射方式免疫BALB/c小鼠，成功制备4份PDCoV ns7和2份ns7a小鼠多克隆抗体，并用ELISA、Western blot和IFA对抗体效价、反应性及特异性进行鉴定。结果显示，本试验成功应用大肠杆菌表达了可溶性ns7和ns7a蛋白，制备的PDCoV ns7和ns7a多克隆抗体效价分别为1∶409 600和1∶12 800,并在Western blot和IFA试验中具有良好的反应性及特异性。结果表明，制备的PDCoV辅助蛋白ns7和ns7a多克隆抗体为深入研究ns7及ns7a蛋白的生物学功能提供了重要工具。

心率变异性是一种在医学研究与临床诊疗中常用的无创生理测量手段，可用于判断神经体液因素对心血管系统的影响。为探究心率变异性在马匹上的研究应用进展，根据近年来国外相关文献讨论其在评估马的气质特征、追踪训练效果、保障动物福利和辅助疾病诊治等方面的应用。心率变异性检测由于其便携、无创、操作简便的优点而具有深远的临床应用潜力，但在马匹临床应用的标准尚未统一。心率变异性的未来应用方向十分广泛，制定统一参考标准及推广应用迫在眉睫。

黄酮类化合物作为食物中含量丰富的一类多酚类化合物，具有抗氧化、抗炎抗菌、抗肿瘤等多种生物活性。除了在疾病治疗上发挥作用以外，目前有关于黄酮类化合物在动物机体发育中的研究也有增多。circRNAs作为一种在骨骼肌富集的新型的非编码RNA,在疾病治疗和机体发育上都发挥着作用。近年来，有研究证明了黄酮类化合物能够通过对circRNAs调控进一步对动物机体疾病治疗和发育产生作用，有关于黄酮类化合物和circRNAs之间对动物机体功能的研究也逐渐成为热点。因此，综述黄酮类化合物在肌纤维类型转变、成肌细胞分化增殖等方面对动物肌肉发育的营养调控作用，及circRNAs对动物肌肉发育的影响，并就两者之间在对肌肉发育调控上可能存在的联系进行概述，可为植物提取物和circRNAs的结合研究提供参考，并为黄酮类化合物作为功能性添加剂在畜牧养殖生产中应用提供新的理论支撑。

重组病毒载体是当前病毒基因工程研究的热点之一。羊口疮(orf),也称羊传染性脓疱皮炎，是由羊口疮病毒(orf virus, ORFV)引起的急性、接触性、嗜上皮性人畜共患传染病。ORFV为痘病毒科(Poxviridae)、脊索动物痘病毒亚科(Chordopoxrinae)的副痘病毒属(Parapoxvirus)成员，线性双股DNA病毒，病毒基因组较大，改造后可容纳较大的外源基因，适合开发为活病毒载体。本文综述了orf重组活病毒载体的优势、构建策略及其应用研究的最新进展，为ORFV研究、重组活病毒开发应用提供参考。