目的：分析阶梯式检测方案在呼吸道传染病病原监测中临床意义，并探讨性别、年龄和季节对呼吸道传染病的影响。方法：选取2021—2023年就诊的呼吸道传染病病人2 268例作为研究对象。分三步共筛查31种呼吸道病原体，第一步筛查最常见的甲型流感病毒、乙型流感病毒和呼吸道合胞病毒；第二步筛查腺病毒、肺炎支原体、副流感病毒等16种较常见的呼吸道病原体；第三步筛查鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌等12种常见下呼吸道致病菌。结果：第一步筛查出34.48%(782/2 268)的阳性标本，平均用时33.59 min；第二步筛查出42.50%(964/2 268)的阳性标本，平均用时4.55 h；第三步筛查出1.76%(40/2 268)的阳性标本，平均用时16.38 h。不同年龄段病人的呼吸道病原体感染率差异无统计学意义（P> 0.05）；冬、春季节呼吸道疾病送检标本数高于夏、秋季节，但各季节呼吸道病原体感染阳性率间差异无统计学意义（P> 0.05）；男性呼吸道感染阳性率为79.99%(1 363/1 704)，高于女性的75.00%(423/564)(P <0.05)。结论：阶梯式检测方案用时少，更经济，病原覆盖面广，对于呼吸道病原监测具有重要的临床应用价值。