目的：探讨RNA原位杂交技术联合原位免疫荧光染色在结核分枝杆菌检测中的应用价值。方法：采用回顾性研究方法，选取肺或淋巴结穿刺或者手术标本病理诊断为肉芽肿性炎病人100例作为研究对象。其中70例为确诊结核病病人(确诊组),30例为非结核病病人(对照组)。以实时荧光定量PCR检测结果为参照，均进行抗酸染色、原位免疫荧光染色、RNA原位杂交技术检测。评价RNA原位杂交技术联合原位免疫荧光染色检测结核分枝杆菌的诊断效能。结果：以实时荧光定量PCR检测结果为金标准，抗酸染色的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度、约登指数分别为30.00%、93.33%、91.33%、36.36%、49.00%、0.233,原位免疫荧光染色分别为51.43%、93.33%、94.74%、45.16%、64.00%、0.447,RNA原位杂交技术分别为77.14%、100.00%、100.00%、65.22%、84.00%、0.771,RNA原位杂交技术联合原位免疫荧光染色分别为84.29%、100.00%、100.00%、73.17%、89.00%、0.843。RNA原位杂交技术联合原位免疫荧光染色的ROC曲线下面积(AUC)为0.951,RNA原位杂交技术AUC为0.768,原位免疫荧光染色AUC为0.843。结论：RNA原位杂交技术联合原位免疫荧光染色的灵敏度及特异度、阳性预测值、阴性预测值、准确度及约登指数均较高，是一种具有潜力的结核分枝杆菌检测方法。