目的 了解医院环境物体表面真菌的分布特征，为临床科学精准制定基于真菌的环境控制策略提供依据。方法 2023年12月7—23日采集某大型三级甲等医院6个科室19类共60份环境标本，分成水相关环境标本组、完整立面环境标本组和卫生洁具环境标本组。对检出真菌的标本进行18S rRNA测序。结果 环境表面标本真菌检出率为20.0%（12/60）,其中内分泌科洗手池真菌菌落计数最高（15 CFU/cm²）,其次是胸外科的空气消毒机出风口和内分泌科的水龙头管腔内（均为10 CFU/cm²）。水相关环境标本组检出的真菌菌属种类最多（14种）,其中曲霉属（100%）、梅氏酵母属（99.06%）、线虫草属（95.63%）、小田酵母属（87.86%）的相对丰度较高。空气消毒机出风口检出较高丰度的毛壳菌属（44.08%）和花冠菌属（39.71%）。3组环境标本之间的α多样性（Shannon与Simpson指数，P值分别为0.661、0.568）和β多样性（P=0.712）比较，差异均无统计学意义。结论 医疗机构在常规落实基础环境清洁消毒的状态下，环境中真菌处于低流行状态。但潮湿物体表面以及空气消毒设备易发生真菌定植，需加强日常监测并采取相应干预措施，以降低感染发生风险。