目的 探讨耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌（CRKP）的分子流行病学特点，揭示其对头孢他啶/阿维巴坦（CZA）的耐药机制。方法 收集2021年1月—2023年9月徐州医科大学附属医院临床首次分离的CZA耐药CRKP,采用基因扩增法和胶体金法检测bla_KPC、bla_NDM、bla_OXA、bla_VIM和bla_IMP五种碳青霉烯酶基因携带情况，采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）方法检测产肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶肺炎克雷伯菌（KPC-KP）相对拷贝数以及表达量，采用全基因测序方法分析KPC突变株的突变位点，以分析CRKP流行特征及对CZA的耐药机制。结果 共分离73株对CZA耐药的CRKP,其中37株（50.68%）为KPC+NDM联产菌株，33株（45.21%）为单产NDM的菌株（单产NDM-5 23株，单产NDM-1 10株）,3株单产KPC的菌株。发现菌株KP-2842为ST11型KPC-33突变株；菌株KP-2127和KP-2189为产KPC-2菌株，与肺炎克雷伯菌ATCC BAA-1705相比，其bla_KPC拷贝量分别上调1.04～3.86倍，而表达量分别增加6.66～12.93倍；胶体金法与PCR结合双向测序方法两者结果一致性良好，同时可以覆盖联产酶及KPC-33突变体的检测。结论 该院CRKP对CZA耐药机制主要由金属酶NDM介导，其中NDM、KPC联产是本地区CRKP的主要特点，部分菌株对CZA耐药可能由bla_KPC-2高拷贝和高表达导致，并在江苏地区的ST11型CRKP中首次发现了KPC-33突变体。