目的 评估新生儿基因筛查（genetic newborn screening, gNBS）在云南地区的应用价值。方法 采用前瞻性研究方法，随机选取2021年2—12月在云南地区出生的3 001例新生儿为研究对象，采用传统新生儿筛查（traditional newborn screening, tNBS）检测生化指标，同时采用靶向二代测序技术对156种疾病相关的159个基因进行筛查。对筛查阳性新生儿进行验证和确诊试验，确诊患儿接受规范治疗和长期随访。结果 3 001例新生儿中，基因初筛阳性者166例，占5.53%；基因携带者1 435例，占47.82%。变异频率前10位的基因为GJB2(21.29%)、 DUOX2 (7.27%)、 HBA (6.14%)、 GALC (3.63%)、 SLC12A3 (3.33%)、 HBB (3.03%)、 G6PD(2.94%)、SLC25A13 (2.90%)、PAH (2.73%)和UNC13D (2.68%)。tNBS和gNBS初筛阳性新生儿中，分别确诊33例（1.10%）和47例（1.57%）患儿，gNBS+tNBS共确诊48例（1.60%）患儿。受试者操作特征曲线分析显示，tNBS、gNBS和gNBS+tNBS确诊疾病的曲线下面积（area under the curve, AUC）分别为0.866、0.982和0.968 (P<0.05)。DeLong检验显示，gNBS、gNBS+tNBS的AUC高于tNBS (P<0.05)。结论 gNBS能够扩展疾病检测范围，与tNBS联合应用，可显著缩短诊断时间，实现尽早干预治疗。[中国当代儿科杂志，2025,27 (6):654-660]