为了得到纯度更高的银耳多糖（TFPS），采用AB-8大孔树脂吸附法、酶法、三氯乙酸（TCA）法、D-葡萄糖δ-内脂（GDL）法和聚酰胺法对粗制银耳多糖（CTFPS）进行纯化即脱蛋白处理。以多糖损失率和蛋白质脱除率为依据选取脱蛋白效果最佳的方法，并通过单因素实验优化银耳多糖脱蛋白工艺条件。利用红外和SEM对脱蛋白前后的银耳多糖进行结构分析，并结合抗氧化活性和吸湿保湿性能测试，对脱蛋白前后的银耳多糖进行生物活性对比。结果表明：AB-8大孔树脂吸附法的脱蛋白效果最佳，最优工艺条件为CTFPS水溶液质量浓度5 mg/mL、AB-8大孔树脂用量100 mg/mL、吸附时间5 h、吸附温度20℃；在此条件下，蛋白质脱除率为82.47%，多糖损失率为18.24%，且银耳多糖脱蛋白纯化后的抗氧化活性和吸湿保湿性能均优于未脱蛋白银耳多糖。