本研究建立了一种能同时快速检测艰难梭菌(Clostridioides difficile)不同毒力基因的四重实时荧光PCR方法。首先,分别以艰难梭菌的tcdA (毒素A基因)、tcdB (毒素B基因)、cdtB (二元毒素B亚基基因)和TPI (丙糖磷酸异构酶基因)为靶基因设计特异性引物和探针,建立多重实时荧光PCR体系;然后,优化该体系中的引物、探针以及退火温度,并检测优化后体系的灵敏度、特异性、重复性等;最后,将其应用于临床样本检测。结果表明,该方法特异性强、重复性好、成本低,能够检测1 000 copies/mL的样本,与其他常见肠道致病菌无交叉反应。