为构建一种新型基因敲除质粒，以pSET4s和pK18mobsac B质粒为基础，通过PCR和酶切连接的方法，构建了新质粒pSETsac B，然后以pK18mobsac B质粒为对照，评价新建质粒对达卡气单胞菌kdp E基因的有痕敲除（带有四环素筛选标记）和无痕敲除效率。结果表明，两种质粒在有痕敲除效率上无差别，但在无痕敲除上，pSETsac B的敲除效率显著高于对照质粒pK18mobsac B。由于p SETsac B为穿梭性温敏质粒，因此，该质粒可望在革兰氏阳性和阴性菌的遗传机制研究中皆可发挥作用，本研究同时也为检视kdp E基因在达卡气单胞菌中的功能提供了前期的突变体材料。