采用水提醇沉工艺提取细脚虫草多糖（Cordyceps tenuipes polysaccharides,CTP），以多糖含量为响应值，在单因素试验基础上，利用Box-Behnken中心组合进行四因素三水平试验设计优化细脚虫草多糖发酵培养工艺，并考察分级醇沉后多糖的体外抗氧化活性。最佳培养基组成为：蔗糖4%，蛋白胨1.5%，磷酸二氢钾0.12%和水蛭0.46%；同时接种量7.3%、装液量36%，初始pH4.2，发酵温度25℃和发酵时间9d，在此条件下菌丝体粗多糖含量为62.08 mg/g，比优化前提高了16.58%。多糖体外抗氧化试验显示，分级醇沉后的CTP70组分的抗氧化效果最佳，且相较于优化前的CTP0组分，在5 mg/mL的浓度下对DPPH自由基清除率提高了22.54%、·OH自由基清除率提高了22.38%，铁离子还原能力提高了51.78%。实验表明，添加水蛭优化后的细脚虫草发酵培养条件有效提高细脚虫草菌丝体多糖产量，同时，CTP70组分表现出良好的抗氧化活性。