牦牛bta-miR-146a对卵巢卵泡颗粒细胞自噬的影响研究

徐业芬, 王运路, 孟朝轶, 刘博华, 昝瑞隆

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高原农业 ›› 2024, Vol. 8 ›› Issue (04) : 367-375. DOI: 10.19707/j.cnki.jpa.2024.04.002

牦牛bta-miR-146a对卵巢卵泡颗粒细胞自噬的影响研究

  • 徐业芬, 王运路, 孟朝轶, 刘博华, 昝瑞隆
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摘要

自噬是细胞广泛存在的程序性死亡机制,通过对细胞内衰老细胞器、长寿命蛋白以及外源病原微生物进行吞噬、降解,以维持细胞平衡。在卵巢中,卵泡颗粒细胞自噬对卵泡发育起着关键作用,失衡会导致闭锁。为探究miR-106a对牦牛卵泡颗粒细胞自噬的影响,本试验通过体外分离培养牦牛卵泡颗粒细胞后,分别转染bta-miR-146a模拟物(bta-miR-146a mimics)和bta-miR-146a抑制剂(bta-miR-146a inhibitor),利用荧光定量RT-PCR法、Western Blot和激光共聚焦法检测细胞的自噬相关基因mRNA和蛋白表达情况。结果显示,转染bta-miR-146a mimic组与mimic NC组相比激光共聚焦可检测到LC3B蛋白荧光强度降低(P<0.01);荧光定量RT-PCR检测发现LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC组相比LC3B、Atg-5和Beclin-1极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1自噬指示基因m RNA表达量极显著降低(P<0.01)。Western Blot检测发现bta-miR-146a inhibitor组自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1表达最高,bta-miR-146a mimic组表达最低;bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a mimic NC组相比,LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著降低(P<0.01),bta-miR-146a inhibitor组与bta-miR-146a inhibitor NC相比LC3B、Atg-5和Beclin-1蛋白表达极显著升高(P<0.01),bta-miR-146a mimic组与bta-miR-146a inhibitor组相比,自噬指示蛋白LC3B、Atg-5和Beclin-1的表达量极显著降低(P<0.01)。上述结果表明bta-miR-146a mimic抑制牦牛卵泡颗粒细胞的自噬,而bta-miR-146a inhibitor促进牦牛卵泡颗粒细胞的自噬。

关键词

牦牛 / bta-miR-146a / 颗粒细胞 / 自噬

中图分类号

S823.85

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徐业芬, 王运路, 孟朝轶, 刘博华, 昝瑞隆. 牦牛bta-miR-146a对卵巢卵泡颗粒细胞自噬的影响研究. 高原农业. 2024, 8(04): 367-375 https://doi.org/10.19707/j.cnki.jpa.2024.04.002

基金

国家自然科学基金(31960661,31460604);; 西藏自治区科学技术厅区域科技协同创新专项(QYXTZX-NQ2022-04);; 西藏自治区科技厅重点研发计划项目(XZ202301ZYO003N04)

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