LTI是植物中一类低温诱导蛋白，在植物响应非生物胁迫中发挥着重要的作用。为明确紫花苜蓿LTI蛋白的结构特征及在不同非生物胁迫下的响应，通过RT-PCR和3′/5′RACE PCR技术，成功从“中苜1号”紫花苜蓿中克隆得到MsLTI65基因cDNA序列。利用生物信息学软件对基因序列和结构进行分析，并与其他植物的LTI蛋白进行系统进化树构建，分析它们之间的进化关系。采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白免疫印迹（western-blot,WB）技术分析MsLTI65在不同非生物胁迫条件下的表达模式。序列分析表明，MsLTI65基因编码区序列长2016bp，编码671个氨基酸，分子量74 kDa，理论等电点为4.55,MsLTI65蛋白与蒺藜苜蓿的MtLTI65蛋白具有较高的同源性。qRT-PCR检测结果表明，MsLTI65基因在冷、盐、干旱、Cu²⁺、Zn²⁺和脱落酸（ABA）胁迫下表达量均受到诱导上调表达。抗体制备结果表明，已成功制备MsLTI65多克隆抗体，该多克隆抗体特异性高，能够识别天然LTI65样本。Western-blot验证结果表明，MsLTI65蛋白受冷、干旱、盐、ABA胁迫诱导表达。以上结果表明，MsLTI65基因可能作为一个正向调控因子在冷、干旱、Cu²⁺、Zn²⁺、盐等多种非生物胁迫信号和ABA激素信号转导过程中发挥重要作用。