【目的】研究秋水仙素溶液质量浓度、处理时间和预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响，优化枣树良种‘京枣39’的增殖和生根培养基，建立‘京枣39’的离体多倍体诱导体系，获得多倍体植株。【方法】采用完全随机区组试验设计，探索不同秋水仙素溶液质量浓度和处理时间组合对‘京枣39’不定芽再生的影响，不同预培养时间对‘京枣39’离体多倍体诱导的影响，不同生长调节剂组合对‘京枣39’增殖培养的影响，不同基本培养基和生长调节剂组合对‘京枣39’组培苗生根培养的影响。【结果】（1）当秋水仙素溶液质量浓度为80 mg/L、处理48 h时‘京枣39’刻伤叶片存活率为（50.00±7.07）%，分化系数为（2.06±0.17）。（2）最佳预培养时间为6 d，并施以80 mg/L秋水仙素浓度处理48 h，获得了纯合四倍体‘京枣39’。（3）最佳增殖培养基为MS+0.8 mg/L 6-BA+0.4 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖，pH=5.8，平均增殖系数为（4.22±0.22）。（4）最佳生根培养基为改良1/2MS+0.8 mg/L IBA+30 g/L麦芽糖，pH=5.8，平均根长为（5.22±0.19） cm；平均生根数为（3.20±0.22）。【结论】初步建立了‘京枣39’的离体多倍体诱导体系，获得了‘京枣39’的多倍体植株，并优化了其增殖培养及生根培养方法。本研究为优良枣树品种‘京枣39’的种质创新提供了切实可行的技术方法，为多倍体诱导在枣树以及其他果树中的应用奠定了试验基础。