【目的】矢车菊花瓣的蓝色呈色和品种间花色变异的分子调控机制尚不明晰。本研究采用Gateway技术构建了矢车菊6个不同花色品种花瓣的酵母cDNA文库，以期进一步通过酵母单杂交或双杂交技术筛选参与调控花瓣呈色的关键互作蛋白。【方法】本研究以白色、粉色、红色、蓝色、紫色和墨色矢车菊花瓣为材料，提取总RNA后分离和纯化mRNA，合成双链cDNA后依次进行BP重组反应和LR重组反应，分别获得初级和次级文库。最后将次级文库质粒转化酵母Y187，获得矢车菊不同颜色花瓣的酵母cDNA文库。【结果】质量鉴定结果显示：初级文库的库容量为1.3×10～7 CFU，重组率为100%，且插入片段长度均在1 000 bp以上；次级文库的库容量为1.6×10～7 CFU，重组率为100%，且插入片段长度均在1 000 bp以上。酵母文库的滴度为3.5×10～7 CFU/mL，随机挑选的24个单克隆经PCR检测后均扩增出明亮条带，重组率为100%，插入片段长度均大于1 000 bp。【结论】本研究构建的矢车菊不同颜色花瓣酵母c DNA文库的质量较高，能满足酵母文库筛选的试验要求，为后续探究矢车菊花瓣的蓝色呈色和品种间花色变异的分子调控机制提供了材料基础。