目的：探究高内涵成像分析技术在无标记检测细胞增殖与迁移中的应用效果。方法：体外培养小鼠黑色素瘤B16-F10细胞，实验组分别添加2.5、5、10、15、30 mmol/L不同浓度的乳酸，对照组加入磷酸缓冲盐溶液（PBS），使用高内涵成像分析系统每15分钟拍摄1次、连续拍摄36 h，检测不同浓度的乳酸对B16-F10细胞的增殖与迁移的影响。结果：高内涵成像分析技术检测显示，不同浓度的乳酸处理后，实验组细胞增殖速度明显快于对照组，且添加15、30 mmol/L乳酸的实验组细胞密度明显高于其他各组。使用高内涵成像分析系统软件进行细胞计数显示，处理后12 h,15、30 mmol/L乳酸添加实验组细胞数较对照组显著增加；且随着培养时间延长，15、30 mmol/L乳酸添加实验组的细胞数均显著高于对照组（均P<0.05）。高内涵成像分析系统软件统计各组处理后0～6 h细胞迁移距离，显示各实验组细胞平均迁移距离均显著高于对照组（均P<0.05），其中5 mmol/L乳酸添加实验组的细胞平均迁移距离最大；各实验组中出现迁移行为的细胞比例均显著高于对照组，随着乳酸浓度增加，迁移行为细胞比例出现降低的趋势。结论：成功建立了应用高内涵成像分析技术快速、无标记、可靠且准确的定量评价细胞增殖和迁移的方法，实验操作较为简单，且能获取直观的图像及多样化的数据统计结果。